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目的:掌握制备TSLC1单克隆抗体技术,制备肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)单克隆抗体并测定效价后,采用方法成熟、成本低廉且最易推广的免疫组织化学染色技术对所选的标本进行检测,来探讨TSLC1蛋白的异常表达与膀胱移行细胞癌发生、发展的相关性。方法:免疫Balb/c雌性小鼠,通过脾细胞和骨髓瘤细胞融合技术备制TSLC1单克隆抗体,通过ELISA法测定TSLC1多克隆抗体和单克隆抗体的效价。同时选取膀胱移行细胞癌(BTCC)蜡块65例(低恶40例,高恶25例),其中Ta-1期的为25例,T2期为20例,T3-4期为20例。正常膀胱粘膜20例,然后应用免疫组化SP法检测TSLC1蛋白表达情况,由两位病理医生根据染色情况确定阴性(-)、弱阳性(+)、强阳性(++),并用IPP6.0图像分析软件对TSLC1蛋白阳性表达进行计量分析((?)±s)。利用SPSS13.0对不同分期、不同病理分级的TSLC1蛋白表达情况统计学分析。结果:我们通过ELISA检测出Balb/c小鼠血清中TSLC1多克隆抗体,在稀释为1:8000的时候OD值为1.355,仍明显高于正常Balb/c小鼠阴性对照组(OD=0.545),表明对小鼠免疫效果良好。在细胞融合后得到22株阳性克隆,有限稀释法进行严格的克隆化,最终保留6株滴度高的能稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株,分别为AD6,BC10,CB7,CE8,DC5,DF4。6株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株进行抗体亚型测定,结果显示:AD6,CE8属于IgG1亚型:BC10,DF4属于IgG2a亚型:CB7,DC5属于IgG3亚型。取AD6细胞为代表扩增培养,10~7细胞注射Balb/c小鼠产生腹水,制备单克隆抗体IgG1,纯化后测其效价为1:100000。免疫组化结果显示高恶性膀胱移行细胞癌中细胞浆、膜TSLC1蛋白阳性表达阴性为88%(22/25),弱阳性为12%(3/25)。低恶性膀胱移行细胞癌中细胞浆、膜TSLC1蛋白表达为:弱阳性为75%(30/40),阴性25%(10/40),这二组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。全部正常膀胱粘膜移行上皮TSLC1蛋白阳性表达为强阳性,明显区别于其它肿瘤组。膀胱肿瘤分期中弱阳性:Ta-1为92%(23/25),T2为60%(12/20),T3-4为10%(2/20),阴性:Ta-1为8%(2/25),T2为40%(8/20),T3-4为90%(18/20),三组之间差异均有统计学意义(P<0.0167),通过IPP6.0计量分析,分级中低恶标本PI为68.55±10.50%;高恶组标本PI为20.65±5.52%,PI与膀胱移行细胞癌病理分级呈现负相关(r=-0.905,P=0.000),在临床分期中,Ta-1组标本PI为82.15±5.52%;T2组标本PI为60.55±10.25%;T3-4组标本PI为18.25±6.58%,PI与膀胱移行细胞癌临床分期呈现负相关(r=-0.932,P=0.000)。结论:我们掌握了制备TSLC1单克隆抗体的技术,并可将其用于膀胱移行细胞癌的生物学行为的检测,免疫组化染色结果令人满意。通过免疫组化我们认为TSLC1蛋白的低表达或不表达与膀胱移行细胞癌发生发展相关,并且膀胱移行细胞癌中细胞膜TSLC1蛋白阳性表达情况(PI)与病理分级、临床分期呈现负相关,在判断膀胱肿瘤恶性程度方面有重要临床价值,故也可用于评价膀胱肿瘤预后,是膀胱肿瘤生物学行为中有价值的标记物。