【摘 要】
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研究目的本实验以高脂饮食建立的NAFLD大鼠模型为研究载体,以肝脏脂质代谢为切入点,采用实时荧光定量PCR法检测调肝祛脂方对法尼醇X受体介导的羧酸酯酶1信号通路基因表达的影响,用酶联免疫吸附法观察调肝祛脂方对大鼠血清羧酸酯酶1水平的影响,探讨调肝祛脂方治疗NAFLD的作用机制,为中药复方防治NAFLD提供科学依据。研究方法1.动物分组及给药本实验采用高脂饮食（88%基础饲料+10%猪油+2%胆固醇
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研究目的本实验以高脂饮食建立的NAFLD大鼠模型为研究载体,以肝脏脂质代谢为切入点,采用实时荧光定量PCR法检测调肝祛脂方对法尼醇X受体介导的羧酸酯酶1信号通路基因表达的影响,用酶联免疫吸附法观察调肝祛脂方对大鼠血清羧酸酯酶1水平的影响,探讨调肝祛脂方治疗NAFLD的作用机制,为中药复方防治NAFLD提供科学依据。研究方法1.动物分组及给药本实验采用高脂饮食（88%基础饲料+10%猪油+2%胆固醇）喂养建立大鼠NAFLD病理模型,将47只SPF级雄性SD大鼠,普通饲料适应性喂养7天后,随机分为正常组（n=9）和造模组（n=38）,正常组大鼠继续予普通饲料喂养,造模组大鼠予高脂饲料喂养,所有SD大鼠均自由进食饮水。共同喂养8周后,随机挑选2只造模组大鼠取材,确认NAFLD病理模型建立成功,将造模组剩余大鼠随机分为模型组（n=9）、调肝祛脂方低剂量组（n=9）、调肝祛脂方中剂量组（n=9）和调肝祛脂方高剂量组（n=9）。制备好调肝祛脂方中药煎剂,根据大鼠体质量,按照100g/1 mL的给药体积,予调肝祛脂方各剂量组大鼠不同浓度的中药灌胃,正常组和模型组大鼠按等体积蒸馏水进行灌胃,连续灌胃4周,造模及给药期间每周定期称取大鼠体重并记录。2.实验指标检测连续给药4周后,对所有大鼠禁食12h,随后取材检测,称取大鼠体质量并计算肝脏指数,使用酶化学法测定大鼠血清中甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶水平,采用HE染色、油红O染色,高倍镜下观察大鼠肝组织病理形态变化及脂滴分布情况,利用酶联免疫吸附法测定血清羧酸酯酶1水平,采用实时荧光定量PCR法检测调肝祛脂方对法尼醇X受体、羧酸酯酶1基因表达水平的影响。结果1.调肝祛脂方对大鼠体重及肝脏指数的影响与正常组相比,模型组大鼠体重及肝脏指数明显升高（P＜0.01）,相较于模型组,调肝祛脂方低、高剂量组大鼠体重明显减轻（P＜0.05）,肝脏指数降低不明显。（P＞0.05）。2.调肝祛脂方对大鼠肝脏病理形态的影响相比于正常组,模型组大鼠肝脏脂肪变性明显,细胞内可见大量红色脂滴和散在脂肪空泡,纤维间隔内可见炎性细胞浸润,相较于模型组,调肝祛脂方低、中、高剂量组大鼠肝细胞内上述表现均有不同程度的改善。3.调肝祛脂方对大鼠血清生化指标的影响与正常组相比,模型组大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、总胆固醇、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶水平明显升高（P＜0.01）,高密度脂蛋白胆固醇水平明显下降（P＜0.01）。相较于模型组,调肝祛脂方低、中、高剂量组大鼠上述血清学指标均有不同程度的降低,高密度脂蛋白胆固醇水平有所升高,其中以调肝祛脂方中剂量组和高剂量组最为显著（P＜0.05）。4.调肝祛脂方对大鼠血清羧酸酯酶1水平的影响与正常组相比,模型组大鼠血清羧酸酯酶1水平显著降低（P＜0.01）,相较于模型组,调肝祛脂方低、中、高剂量组大鼠血清羧酸酯酶1水平均有所提高,以调肝祛脂方中剂量组和高剂量组更为显著（P＜0.01）。5.调肝祛脂方对大鼠法尼醇X受体、羧酸酯酶1基因表达水平的影响与正常组相比,模型组大鼠肝脏法尼醇X受体、羧酸酯酶1基因表达水平显著下调（P＜0.05）,相较于模型组,调肝祛脂方低、中、高剂量组大鼠法尼醇X受体基因表达水平明显升高（P＜0.01）,调肝祛脂方中、高剂量组大鼠羧酸酯酶1基因表达水平明显升高（P＜0.01）。结论调肝祛脂方对高脂饮食诱导的NAFLD大鼠具有较好的治疗效果,其作用机制可能与上调法尼醇X受体表达,进而提高羧酸酯酶1表达水平有关,从而调节大鼠脂质代谢,降低血清酶学水平,减轻肝细胞脂肪变性和炎症损伤,改善肝脏病理学,起到防治NAFLD的作用。
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