大豆丙二烯氧化物环化酶基因(GmAOC)家族克隆、进化与功能研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:fafafaalex
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
大豆(Glycine max(L.)Merrill)作为一种重要的经济作物,为人类提供了优质蛋白及油脂。然而多种虫害严重影响大豆的产量和品质。作为一类新发现的植物激素,茉莉酸在植物多种胁迫的防御反应中起重要作用,尤其是生物胁迫。丙二烯氧化物环化酶是茉莉酸合成途径的关键酶,决定了茉莉酸的天然立体异构型。本研究从大豆中克隆了6个AOC同源基因,分布于1、2、8、13、18、19号染色体上。6个AOC同源基因的开放阅读框长度从759bp到771bp不等,编码253-257个氨基酸。6个蛋白分子量均在28千道尔顿左右,蛋白等电点从8.75到9.23。根据家族的进化关系,将6个AOC蛋白分成3个亚家族,相似性从78%到94%。分析氨基酸序列,发现6个AOC蛋白均包含高度保守的p折叠和N端叶绿体转运肽结构。亚细胞定位实验显示AOC蛋白均定位于叶绿体。进化选择压分析结果表明:GmAOCl, GmAOC2, GmAOC3 和 GmAOC4受到正选择作用,而GmAOC5和GmAOC6符合中性进化。同时克隆6个AOC同源基因的启动子并对顺式作用元件进行分析,除了发现一些转录必须的基本元件如TATA-box, CAAT-box以外,6个启动子序列中还包含一些能够响应盐、高温、乙烯、水杨酸的顺式作用元件,以及富含TC的重复元件。荧光定量PCR结果显示6个大豆AOC基因表达具有组织特异性。6个AOC基因中只有GmAOCl在种子中有微量表达,其余的基因在种子中未检测到表达。GmAOC2 和 GmAOC5分别在根和茎中有较高表达,GmAOC3是唯一在叶中高表达的基因,而GmAOC4 和 GmAOC6在所有组织中表达均很微弱。此外,6个AOC基因在不同胁迫处理下的表达也呈现差异性。斜纹夜蛾啃食诱导后,GmAOC3快速响应,并其表达在最短时间内达到峰值。而在盐胁迫和干旱胁迫中,GmAOC1和GmAOC2分别在最短时间内上调到最高水平。氧化胁迫显著诱导了GmAOC5的表达,而GmAOCl表达量反而下降,其余4个基因表达没有明显变化。GmAOC3基因能够快速响应斜纹夜蛾的取食诱导,AOC基因与植物抗虫性之间的关系非常值得进一步深入研究。结合转基因技术获得过表达GmAOC1, GmAOC3和GmAOC5基因的转基因烟草,并通过昆虫饲喂试验来评价抗虫性的提高。在斜纹夜蛾自由取食试验中,与野生型烟草相比,过表达GmAOC1和GmAOC3的转基因烟草叶片损失明显较少,斜纹夜蛾更多的取食了野生型烟草叶片。而在饲喂斜纹夜蛾试验中,与野生型烟草相比,过表达GmAOC1和GmAOC3的转基因烟草叶片损失也明显较少,且以过表达GmAOC1 和 GmAOC3的转基因烟草叶片为食的斜纹夜蛾相对生长率明显下降。通过扫描电镜观察发现,与野生型烟草相比,过表达GmAOC1和GmAOC3的转基因烟草叶片茸毛显著增加。QRT-PCR结果显示,过表达GmAOC1和GmAOC3的转基因烟草的可诱导型胰蛋白酶抑制剂基因和烟碱合成关键酶基因的表达显著上调。对过表达GmAOC1和GmAOC3的转基因烟草的苯丙氨酸解氨酶酶活,多酚以及茉莉酸含量进行分析,结果均高于野生型烟草相应水平。在过表达GmAOC1和GmAOC3的转基因烟草的挥发物中发现了11种含量增加且与抗虫相关的植物挥发物。过表达GmAOC5的转基因烟草抗虫性没有提高,且未出现上述形态和生理指标的变化。以上结果表明过表达GmAOC5和GmAOC3基因提高了转基因烟草的抗虫性,本研究为植物的抗虫分子育种提供了候选基因及理论支持。
其他文献
脂肪氧合酶(lipoxygenase, LOX)催化具有顺,顺-1,4-戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸的双加氧反应,如亚油酸、亚麻酸。在面粉加工过程中可催化分子氧对面粉中的具有戊二烯1,4双键的油脂发生氧化,形成的不稳定的氢过氧化物能诱导面筋蛋白质分子聚合,从而起到增强面筋的作用;并且能够破坏胡萝卜素的双键结构,从而使面粉变白。因此,脂肪氧化酶兼具强筋和漂白的功效,可以减少或替代强筋剂溴酸钾及漂白剂
本实验旨在研究妊娠期母体应激是否会对其子代肝脏胆固代谢产生影响以及其作用的调节。实验分为三个部分,第一部分研究妊娠期母猪热应激对仔猪生产性能及血液生化指标的影响。第二部分研究妊娠期母猪热应激对子代肝脏胆固醇代谢的影响。第三部分以SD大鼠为模型,研究母鼠妊娠期DEX处理以及添加菊粉对子代肝脏脂质代谢的影响及其调节作用。1妊娠期母猪热应激对仔猪生产性能及血液生化指标的影响本实验选取大白×长白初产母猪1
表观遗传变化是指细胞内除了遗传信息外的其它可遗传物质发生了改变,即基因型未发生改变而表型却发生了变化,且这种变化在发育和细胞增殖过程中能稳定传递。表观遗传机制是哺乳动物正常发育和维持组织特异性基因表达模式所必需的。其中,染色质中组蛋白的转录后修饰和DNA自身的甲基化是基因组表观修饰的两个主要机制,并且这两种机制存在相互作用和影响。近年来深入研究表观遗传机制、不同机制之间的相互作用和表观遗传变化成为
学位
学位
学位
矿物风化作用是地球表面发生的最重要的地质过程之一,是各种地貌形态和土壤形成的基础,硅酸盐矿物风化在陆地生态系统中扮演着重要的作用。微生物与矿物相互作用机制已经被学者广泛的研究及讨论,但对这些细菌风化矿物的分子作用机制研究极其薄弱,尤其是细菌铁响应调节基因在硅酸盐矿物风化过程中的作用机制还尚未见报道。本文以一株实验室保藏的产多糖和铁载体的高效矿物风化细菌Rhizobium pusense S41为研
随着慢生活体验成为时下越来越流行的旅游方式,乡村旅游发展迎来了前所未有的契机。然而当前乡村旅游发展中也出现了交通设施局限,服务及经营理念落后等弊端,严重制约景区的发展,影响了旅游者的乡村旅游体验感,导致很多乡村旅游景区遭遇了发展瓶颈。因此,乡村旅游亟需从游客需求出发,深入剖析乡村旅游中存在的问题,对乡村旅游景区进行优化提升,激发旅游景区发展活力。本文基于顾客满意度理论,以高淳国际慢城为研究对象开展
抗菌肽是上世纪八十年代发现的一种小分子蛋白类物质,由于它不同于抗生素的独特的杀菌机制,使细菌很难对它产生耐药性,以及抗菌谱广、具有超强的杀灭效果,快速的杀灭速度,因此抗菌肽被认为是潜在的在临床上能替代抗生素来治疗细菌感染的药物。在本文中,通过两步纯化(Sephadex G-50分子筛和反相高压液相RP-HPLC)从大头蛙(Limnonectes Kuhlii)的皮肤分泌物中分离纯化得到五种新的抗菌
作物核心种质指的是以最小的资源份数和遗传重复最大限度地代表其遗传多样性,构建核心种质可以克服和缓解庞大的资源规模所带来的相应困难和压力,为种质资源的保存、评价和创新利用提供便利以及节约成本。南瓜(Cucurbita moschata L.)在瓜类嫁接中有良好的表现,经过长时间的选育,出现了大量的砧用南瓜品种,其中不乏同名异物、同物异名现象,构建砧用南瓜核心种质有利于对优良砧用南瓜品种重点保存。本研