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第一部分长春胺对非动脉炎性前部缺血性视神经病变大鼠模型的神经保护作用及机制研究目的:研究长春胺对非动脉炎性前部缺血性视神经病变大鼠模型的神经保护作用及机制研究。方法:将90只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠随机分为6组:正常对照组(blank control group,n=15)、单纯造模组(simple model group,n=15)、造模竣甲基纤维素钠灌胃组(NaCMC group,n=15)、造模长春胺灌胃组(Vincamine group,n=15),造模PI3K抑制剂LY294002玻璃体腔注射并长春胺灌胃组(IVT LY+Vincamine group,n=15),造模DMSO玻璃体腔注射并长春胺灌胃组(IVT DMSO+Vincamine group,n=15)。采用光动力法造模,灌胃在造模24h验证模型成功后开始,持续28天;玻璃体腔注射在造模后立即进行,注射剂量2μl。造模后1d、28d进行各组大鼠眼底照相及眼底血管造影检查(FFA),比较造模前后眼底的改变。在造模后1d、28d取正常对照组及单纯造模组大鼠眼球各2只进行视网膜、视神经HE染色。造模后28d,对各组大鼠进行FVEP视功能检查;采集各组大鼠血浆测量NO浓度;处死所有大鼠摘取眼球,取正常对照组及单纯模型组视神经经横断面进行甲苯胺蓝染色;各组选取视网膜进行铺片Brn-3a染色视网膜神经节细胞(RGCs)计数,RT-PCR 检测 eNOS、Akt、ET-1 的相对表达量,Western-blot检测p-Akt、Akt、eNOS的表达情况。结果:造模后1d,与正常对照组相比,各个模型组大鼠眼底照相均发现视盘水肿,FFA检查可见视盘荧光渗漏,造模后28d时视神经萎缩变白;将眼底照片进行比较,各组之间视神经萎缩程度未见明显差异。造模后1d单纯造模组HE染色显示视网膜及视盘组织水肿,造模后28d视网膜神经纤维层变薄,RGC凋亡,甲苯胺蓝染色显示视神经轴突变性,结构排列杂乱无章。FVEP结果显示各组P1波潜时值比较无明显区别,单纯模型组P1波振幅明显降低(18.68±2.51μVvs 7.34±1.38μV,p=0.000);造模长春胺灌胃组P1波振幅值较造模羧甲基纤维素钠灌胃组升高(13.20 ± 3.71 μV vs 8.18 ± 2.65μV,p=0.009),造模 PI3K 抑制剂 LY294002玻璃体腔注射并长春胺灌胃组P1波振幅值较造模DMSO玻璃体腔注射并长春胺灌胃组降低(8.22±2.38 μV vs 13.50±4.82 μV,p=0.006)。NO浓度测量结果显示,单纯模型组NO浓度较正常对照组明显降低(15.4±3.7μmol/L vs 33.4±4.9μmol/L,p=0.000),造模长春胺灌胃组NO浓度较造模羧甲基纤维素钠灌胃组增加(74.3±6.5 μmol/L vs 13.9±3.4 μmol/L,p=0.000),经长春胺灌胃处理的三个组 NO浓度值均较未予以长春胺灌胃组高。视网膜铺片Brn3a标记结果显示,单纯模型组RGCs数量较正常对照组明显减少(801±135 vs 2286±407,p=0.000),造模长春胺灌胃组RGCs数量较造模羧甲基纤维素钠灌胃组增加(1356±208 vs 829±199,p=0.002),造模PI3K抑制剂LY294002玻璃体腔注射并长春胺灌胃组RGCs数量较造模DMSO玻璃体腔注射并长春胺灌胃组减少(915±165 vs 1236±220,p=0.044)。Western-blot结果表示,单纯模型组的p-Akt、eNOS相对表达量,与正常对照组相比明显降低;造模长春胺灌胃组p-Akt、eNOS与造模羧甲基纤维素钠灌胃组相比,相对表达量增加;造模PI3K抑制剂LY294002玻璃体腔注射并长春胺灌胃组p-Akt、eNOS相对表达量较造模DMSO玻璃体腔注射并长春胺灌胃组降低;Akt相对表达量在各组之间没有统计学差异。RT-PCR结果显示,与正常对照组相比,单纯模型组eNOSmRNA相对表达量明显降低;造模长春胺灌胃组eNOS mRNA相对表达量较造模羧甲基纤维素钠灌胃组升高,造模PI3K抑制剂LY294002玻璃体腔注射并长春胺灌胃组eNOS mRNA相对表达量较造模DMSO玻璃体腔注射并长春胺灌胃组降低。单纯模型组ET-1 mRNA相对表达量较正常对照组明显升高,造模长春胺灌胃组ET-1 mRNA相对表达量较造模羧甲基纤维素钠灌胃组降低,造模PI3K抑制剂LY294002玻璃体腔注射并长春胺灌胃组ET-1 mRNA相对表达量较造模DMSO玻璃体腔注射并长春胺灌胃组升高,Akt mRNA的表达在各组之间无统计学差异。结论:长春胺对非动脉炎性前部缺血性视神经病变大鼠模型具有神经保护作用,可能是通过PI3K/Akt/eNOS信号通路实现。第二部分长春胺缓释胶囊治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变的效果及安全性观察目的:观察长春胺缓释胶囊治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变的临床疗效及安全性。方法:将2015年1月-9月来我院就诊、急性期发病的单眼非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)患者随机分为对照组、治疗组,所有患者均给以大剂量激素(甲基强的松龙500-1000mg)、维生素B1、弥可保营养神经治疗的同时,治疗组给以长春胺缓释胶囊口服治疗,30mg/Bid,疗程为3月。观察比较两组患眼治疗前后最佳矫正视力(BCVA)、平均视野缺损(MD)、平均盘周神经纤维层厚度(RNFL)、视网膜神经节细胞复合体厚度(GCC)、PVEPP100波潜伏期及振幅等变化。结果:一共纳入42例患者42只眼,其中治疗组27人27眼,年龄33-79岁,平均(55.55±11.83)岁;对照组15人15眼,年龄40-70岁,平均(55.71±10.06)岁;治疗之前两组各项指标相互比较,没有统计学差异。治疗后,治疗组患眼视力治疗有效率(55.6%)较对照组高(33.3%);治疗组与对照组患眼MD均较治疗前降低,差异有统计学意义(t=2.342、2.269,P=0.027、0.041)。治疗后,治疗组与对照组P-VEP振幅较治疗前均未见明显变化,差异无统计学意义(t=1.952、1.840,P=0.062、0.089);治疗组与对照组P-VEP潜时值亦无统计学差异(t=2.018、1.301,P=0.054、0.216);治疗组与对照组,盘周神经纤维层厚度、神经节细胞复合体厚度都比治疗前变薄,差异均有统计学意义(P=0.000),对照组萎缩程度更严重。两组治疗均有效,治疗组效果优于对照组。尚未发现与长春胺缓释胶囊的口服治疗相关的不良事件发生。结论:长春胺缓释胶囊治疗NAION中具有较好的临床疗效及安全性,能够起到辅助治疗、减少视神经损伤的作用。