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EB病毒相关淋巴组织增殖性疾病包括临床上的慢性活动性EB病毒感染、EBV相关的噬血细胞综合征、儿童EBV阳性T细胞淋巴组织增殖性疾病等一大类疾病,从增殖的淋巴细胞类型可划分为B细胞以及T/NK细胞两大类。免疫力正常个体中EB病毒相关T细胞淋巴组织增殖性疾病(EB-T LPD),并不多见,目前报道的病例主要分布在亚洲和南美洲地区。该病多为系统性疾病,主要累及淋巴结和肝、脾,也可累及皮肤、胃肠道及其它内脏器官。主要临床表现为:长期(>3个月)反复发热和全身多器官受损表现。部分患者死于严重并发症或进展为恶性淋巴瘤,预后不良。淋巴结形态学表现为T区淋巴结增宽直至正常淋巴结结构消失,在炎性反应背景中,以核不规则的中小异型淋巴细胞浸润为主,可见散在大细胞;若病变中细胞呈单一性改变时,浸润细胞以大中细胞为主。从增生淋巴细胞的克隆性来看,该病变也包括多克隆、寡克隆和单克隆增生。根据组织结构、细胞形态并结合克隆性分析,将此类疾病分成不同等级:A1型:多形性组织学特征及多克隆T细胞增生;A2型:多形性组织学特征以及单克隆T细胞增生;A3型:单形性组织学特征以及单克隆T细胞增生;B型:单形性组织学特征伴单克隆T细胞增生和暴发性临床进程。本课题研究本地一组EBV-T LPD的克隆性,并以NK/T细胞淋巴瘤和鼻咽癌做为对照,研究在三组疾病中的EB病毒基因多态性和凋亡相关蛋白表达,探讨EB病毒在EBV-T LPD发病机制中的作用。本课题分为以下三个部分:第一部分EBV-T LPD中T细胞受体基因重排克隆性的研究[目的]收集广西医科大学第一附属医院2008年8月-2011年3月期间EBV-T LPD病例并检测其T细胞受体(TCR)基因重排的情况,研究该组病例中EBV-T LPD的淋巴组织增生的性质。[材料和方法]从档案材料中筛选EBV-T LPD病例,根据临床表现、组织形态学、免疫标记以及EBER原位杂交确认诊断,采用BIOMED-2PCR方案及异源双链分析法,检测病例T细胞受体中TCRβ(TCR B)和TCR γ (TCR G)基因克隆重排情况。[结果]10例EBV-T LPD中TCRβ(TCR B)和TCR y (TCR G)基因均为多克隆重排。[结论]鉴定淋巴细胞TCR是否为单克隆起源,是鉴别淋巴组织非肿瘤性增生和肿瘤性增生的有力佐证。用BIOMED-2PCR方案检测TCR基因重排,是判断EBV-T LPD淋巴细胞增生性质的客观准确的检测方法。研究中10例EBV-T LPD的TCR基因均为多克隆重排,表明本组病例病变仍为A1型,尚未发展到淋巴瘤阶段;值得注意的是即使是A1型患者,其临床表现也可以是急进、凶险的,提示EBV-T LPD中TCR的克隆性与其临床进程并不完全对应。第二部分EBV-T LPD、NK/T细胞淋巴瘤及鼻咽癌中EBV基因型及变异型的研究[目的]分析广西地区与EB病毒相关的EBV-T LPD、NK/T细胞淋巴瘤及鼻咽癌中EBV的基因型及基因的多态性,确定是否存在与EBV-T LPD、NK/T细胞淋巴瘤及鼻咽癌相关的特定EBV基因类型,探讨广西地区EB病毒基因型与这些疾病的关系,帮助阐明EB病毒的致病机制。[材料和方法]使用PCR-RFLP和DNA测序方法,扩增检测五个不同的EBV基因片段,研究实验中收集的10例EBV-T LPD、16例NK/T细胞淋巴瘤及54例鼻咽癌中的EBV基因类型和变异情况,统计分析不同EBV类型在三种不同疾病中的比例。[结果](1)5种EBV基因片段在10例EBV-T LPD、16例NK/T细胞淋巴瘤及54例鼻咽癌标本中扩增成功;(2)EBV-T LPD标本中的EBV基因型以A型为主(10/10,100%),变异型以F型(7/10,70%)、Ⅰ型(10/10,100%)、XhoI—型(10/10,100%)、del-LMP1(10/10,100%)型为主;(3)NK/T细胞淋巴瘤中的EBV基因型以A型为主(11/16,68.8%),变异型以F型(13/16,81.3%)、I型(13/16,81.3%)、XhoⅠ—型(15/16,93.7%)、del-LMP1(9/16,56.3%)型为主;(4)鼻咽癌中的EBV基因型以A型为主(54/54,100%),变异型以f型(44/54,81.5%)、工型(54/54,100%)、XhoⅠ—型(54/54,100%)del-LMP1(52/54,96.3%)型为主;(5)通过卡方检验,A型EB病毒在三组病例比率的差别有统计学意义,P=0.000。组间比较,鼻咽癌中A型EB病毒比率比NK/T细胞淋巴瘤高,P=0.000。(6)F变异型EB病毒在三组病例比率的差别有统计学意义,P=0.000。组间比较,EBV-T LPD中F变异型EB病毒比率比鼻咽癌高,P=0.003;NK/T细胞淋巴瘤中F变异型EB病毒比率比鼻咽癌高,P=0.000;(7)工变异型EB病毒在三组病例比率的差别有统计学意义,P=0.006。组间比较,鼻咽癌中Ⅰ变异型EB病毒比率比NK/T细胞淋巴瘤高,P=0.011。(8)XhoⅠ—变异型EB病毒在三组病例比率的差别无统计学意义,P=0.195。(9)del-LMP1变异型EB病毒在三组病例比率的差别有统计学意义,P=0.000。组间比较,EBV-T LPD中del-LMP1变异型EB病毒比率比NK/T细胞淋巴瘤高,P=0.046;鼻咽癌中del-LMP1变异型EB病毒比率比NK/T细胞淋巴瘤高,P=0.000。[结论](1)A型EB病毒株是本地三种EBV相关疾病/肿瘤的优势病毒株,而B型EB病毒株也参与部分NK/T细胞淋巴瘤的发生。(2)本地三种疾病均以“工”变异型和XhoⅠ—变异型的EB病毒为主,提示这两种EB病毒变异型可能与地域分布有关。(3)本地EBV-T LPD和NK/T细胞淋巴瘤病例中EB病毒以F变异型为主,与鼻咽癌中以f变异型为主明显不同,提示EB病毒F变异型与淋巴细胞病变关系密切,而f变异型与鼻咽上皮病变关系密切。(4)del-LMP1变异型与EBV-T LPD、鼻咽癌关系密切,而NK/T细胞淋巴瘤中del-LMP1型及wt-LMP1变异型均有出现。(5)除了“F”和“f”变异型显示出疾病细胞类型的倾向外,EBV-T LPD中的EBV基因特征与鼻咽癌类似,而与NK/T细胞淋巴瘤中病毒特征不尽相同。特定的EB病毒基因型及变异型可能选择性影响某些肿瘤、疾病的发生。第三部分EBV-T LPD.NK/T细胞淋巴瘤及鼻咽癌中NF-κB、bcl-2及survivin的表达及意义[目的]研究NF-κB、bcl-2及survivin在EBV-T LPD、NK/T细胞淋巴瘤及鼻咽癌中的表达情况,旨在探讨3个与抗凋亡有关的蛋白之间的关系及在不同疾病发生发展中的作用。[材料和方法]采用原位杂交法筛选出18例EBV-T LPD、24例NK/T细胞淋巴瘤及74例鼻咽癌EBER日性的标本;采用免疫组化法检测NF-κ B、bCl-2及survivin在18例EBV-T LPD、24例NK/T细胞淋巴瘤及74例鼻咽癌中的表达情况。[结果](1)18例EBV-T LPD、24例NK/T细胞淋巴瘤及74例鼻咽癌病例其EBER均为阳性;(2)NF-κB、bCl-2及survivin在EBV-T LPD中的表达率分别为61.1%(11/18)、44.4%(8/18)、16.7%(4/18);(3)NF-κB、bcl-2及survivin在NK/T细胞淋巴瘤中的表达率分别为54.2%(13/24)、37.5%(9/24)、50%(12/24);(4)NF-κB、bcl-2及survivin在鼻咽癌组织中的表达率分别为74.3%(55/74)、81.1%(60/74)、58.1%(43/74);(5)通过卡方检验,bCl-2在三组病例阳性率的差别有统计学意义,P=0.000。组间比较,EBV-T LPD中的bCl-2表达低于鼻咽癌,P=0.004;NK/T细胞淋巴瘤bcl-2表达低于鼻咽癌,P=0.000;survivin在三组病例阳性率的差别有统计学意义,P=0.024。组间比较,EBV-T LPD中survivin表达低于鼻咽癌,P=0.006。(6)相关性分析显示:鼻咽癌中NF-κB与bCl-2有相关性,P=0.049,r=0.192。NK/T细胞淋巴瘤中NF-κB与survivin有相关性,P=0.000,r=0.553。[结论]与肿瘤组相比,本组EBV-T LPD中凋亡相关蛋白bCl-2与survivin的表达均较低,提示在多克隆阶段的EBV-T LPD中,淋巴细胞的抗凋亡机制尚未被激活。同为EBV相关的恶性肿瘤,上述两种凋亡蛋白的表达有差异:bCl-2在鼻咽癌病例的表达高于NK/T细胞淋巴瘤,且通过相关性分析发现鼻咽癌中NF-κB与bcl-2呈正相关关系,而在NK/T细胞淋巴瘤病例中NF-κB与survivin呈正相关关系,提示鼻咽癌和NK/T细胞淋巴瘤的发生均涉及凋亡机制,但两者的抗凋亡路径有所不同,其机制值得进一步研究。