甘薯是世界上重要的粮食、饲料和工业原料用作物,在世界粮食生产中总产排列第七位。甘薯黑斑病是为害甘薯最普遍而严重的病害,该病在世界上的许多地区均有发生,在我国每年由甘薯黑斑病造成的甘薯产量损失在10%左右。由于甘薯黑斑病是一种传播途径较多的顽固性病害,天然存在的高抗黑斑病菌的材料十分稀少,因此通过常规育种手段选育抗病甘薯品种较为困难,目前大多采用薯块储藏时药剂浸种的方法防治,而利用生物技术手段创造抗病材料获得抗病品种是防治该病害最经济和有效的方法。本研究主要内容为甘薯黑斑病菌的分离纯化和利用lambda噬菌体构建了甘薯黑斑病菌基因组文库,为下一步筛选甘薯黑斑病菌无毒基因,构建甘薯抗病基因的转基因表达载体奠定基础。本研究第一部分从病薯中分离得到的甘薯黑斑病菌通过甘薯黑斑病室内鉴定,调查17-7渝123、18-3南1552、Z5866、2-7、Sy046等76个甘薯品种的平均病斑直径,以胜利百号、徐薯18和52-45为参试对照种,结合对照品种的抗性表现,确定76个不同品种的抗感性。本试验结果表明17-7渝123、19-3、②-128等14个为高抗品种,18-3南1552、②-123、20-3等23个为中抗品种,Z5866、2-7、Sy046、36号等39个为感病品种。本试验第二部分从收集到的病薯中分离纯化黑斑病菌,通过方法摸索提取高质量的基因组DNA,选择合适的限制性内切酶BamHⅠ进行部分酶切使之成为适宜的片段,应用QIAGEN试剂盒法分离大小在9～23kb之间的片段。将此回收的大小合适的外源DNA片段与载体DNA(λ噬菌体载体,λDASHⅡVector)进行连接,经体外包装,转染细菌,得到一组含有不同DNA片段的重组噬菌体颗粒。通过倒平板测定包装的噬菌体滴度,计算出噬菌斑形成率为4.12×10~5pfu/μg,说明所建立的基因组文库是较为完整的。挑取数个噬菌斑,提取重组λ噬菌体DNA,酶切检查插入片段的大小,其插入片段在9～23kb之间。结果表明回收得到的DNA片段很好地插入载体并且片段大小完全符合基因组文库构建要求。