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甲型流感病毒(IAV)的非结构蛋白1(NS1)是一种多功能的蛋白。在病毒的复制周期中，NS1蛋白扮演着重要角色。IAV通过NS1劫持先天免疫逃避宿主的抗病毒防御。NS1也能够被磷酸化修饰动态调节蛋白功能。本研究的第一部分主要介绍NS1蛋白的新的磷酸化位点及其功能。通过质谱我们鉴定苏氨酸80 (T80)为流感病毒A/WSN/1933 (H1N1) (WSN)的NS1磷酸化残基。通过生产编码NS1 T80E（模拟磷酸化）和T80A（去磷酸化）的重组病毒，表征该磷酸化位点在病毒复制期间的作用。我们发现T80E突变减弱了病毒在细胞和小鼠中的复制。在进一步的研究中，T80E突变体降低了NS1与病毒核蛋白(NP)之间的结合力，导致病毒核糖核蛋白（vRNP）介导的病毒转录受损。T80E突变体还降低了NS1与视磺酸诱导的基因1蛋白(RIG-I)的亲和力导致不能抑制干扰素(IFN)产生。总之，研究显示了80位磷酸化对NS1的负调控。NS1的精氨酸38和赖氨酸41是与RIG-I相互作用的关键位点。在第二部分中，我们使用敲除RIG-1的293T细胞包装表达编码NS1 R38A/K41A的干扰素敏感型WSN病毒。NS1-R38A/K41A病毒几乎失去了对抗天然免疫的能力，并且在传代3-6次后不再在A549，MDCK和Vero细胞中复制。这表明NS1-R38A/K41A病毒的复制在常规细胞中受到限制。我们进一步建立了基于Tet-On 3G系统的表达WSN病毒的野生型(WT) NS1的稳定的Vero细胞系。NS1-R38A/K41A病毒能够在这种细胞系中稳定增殖至少20代。在小鼠模型中，NS1-R38A/K41A病毒几乎失去致病力，引发肺组织中高水平的IFN-α/β产生，并在相对较短的时间内从宿主中消除。此外，该病毒诱导针对不同毒株的高滴度中和抗体，并提供100％针对WSN病毒的保护。因此，NS 1-R38A/K41A病毒有潜力作为候选疫苗。在第三部分，我们发现了NS1在线粒体中的新定位。NS1依赖TOM复合物进入线粒体，其85-170残基为关键区。NS1与多种线粒体蛋白相互作用并有助于病毒复制。流感病毒感染早期通过NS1的相关功能促进宿主代谢，改变宿主代谢通路。