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目的:通过观察不同浓度尿酸对原代培养的乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖情况、胶原合成及炎性分泌的影响,以及microRNA-155(miR-155)在其中的作用,探讨尿酸诱导心肌纤维化的分子机制,为心肌纤维化提供新的靶向治疗方案。方法:⑴CFs的分离培养:取2~3 d的Wistar大鼠乳鼠在无菌环境下取出心脏,剪取心室并剪成大小约1mm~3的碎块,用胰蛋白酶消化吹打为细胞悬液,在细胞培养箱中通过差速贴壁法获取CFs。⑵MTT检测:取CFs培养,状态良好时,接种于96孔板培养24h,给予不同浓度的尿酸(200、400、600、800μmol/L)刺激,分别作用24h,用MTT法检测不同浓度尿酸对CFs的增殖情况的影响。⑶羟脯氨酸检测:取CFs培养,状态良好时,接种于6孔板培养24h,给予不同浓度的尿酸(200、400、600、800μmol/L)刺激,分别作用24h,用羟脯氨酸法检测胶原蛋白含量。⑷ELISA检测:取CFs培养,状态良好时,接种于6孔板培养24h,给予不同浓度的尿酸(200、400、600、800μmol/L)刺激,分别作用24h,ELISA法检测培养细胞上清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。⑸细胞转染:向CFs转染miR-155inhibitor,选择前述实验结果较为稳定的尿酸浓度(600μmol/L)刺激CFs,设尿酸组、尿酸+阴性对照组以及尿酸+inhibitor组,用荧光定量PCR检测各组miR-155在CFs中的表达情况。⑹荧光定量PCR检测尿酸组、尿酸+阴性对照组以及尿酸+inhibitor组CFs中IL-6、IL-1β、TNF-α、Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA的表达水平。⑺Western blot检测尿酸组、尿酸+阴性对照组以及尿酸+inhibitor组CFs中IL-6、IL-1β、TNF-α、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白的表达水平。结果:⑴CFs形态,通过倒置显微镜观察,3~5d呈融合状态,细胞大且薄,呈长梭形或多角形,略透明,排列紧密,交叉重叠生长,无自发搏动。⑵CFs的增殖能力,200μmol/L尿酸组与对照组相比无显著性差异,400μmol/L、600μmol/L、800μmol/L与正常组相比明显增加(P﹤0.05)。⑶CFs胶原蛋白含量,200μmol/L尿酸组与对照组相比无显著性差异,400μmol/L、600μmol/L、800μmol/L与正常组相比OD值明显增加(P﹤0.05)。⑷CFs炎性因子含量,与对照组相比,各组IL-6、IL-1β、TNF-α的含量均显著增加(P﹤0.05)。⑸细胞转染后,尿酸(600μmol/L)作用24h,荧光定量PCR检测结果示,尿酸+inhibitor组miR-155的相对表达量明显高于尿酸组及尿酸+阴性对照组(P﹤0.05)。⑹荧光定量PCR检测结果示,miR-155抑制物能部分抑制尿酸(600μmol/L)诱导的IL-6、IL-1β、TNF-a、Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA表达增加(P﹤0.05)。⑺Western blot结果示,miR-155抑制物能部分抑制尿酸(600μmol/L)诱导的IL-6、IL-1β、TNF-a、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白表达增加(P﹤0.05)。结论:实验结果表明,高浓度的尿酸可以诱导CFs增殖,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ胶原合成增加,IL-6、IL-1β、TNF-α炎性分泌增加,且miR-155参与这一过程并发挥作用,抑制miR-155可以部分抑制尿酸对CFs产生的影响。