荷叶铁线蕨和鹿角蕨遗传转化体系的研究

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本实验以荷叶铁线蕨(Adiantum reniforme var. sinense)为材料,研究了不同激素对荷叶铁线蕨原叶体增殖的影响,优化了荷叶铁线蕨的快繁体系。并以实验室条件下正常分化的孢子体走茎为材料探讨不同生长调节剂对该蕨类植物通过GGB途径再生的影响,包括GGB的诱导,增殖与分化,建立了荷叶铁线蕨的直接再生体系;以鹿角蕨(Platycerium wallichii)孢子叶为材料,对GGB诱导,GGB增殖与分化,不定芽诱导生根整个过程不同生长调节剂的影响进行了研究;最后尝试了用荷叶铁线蕨的原叶体,鹿角蕨的GGB做为受体材料,采用农杆菌介导法,对两种蕨类植物的遗传转化体系进行了摸索。主要结果如下:以荷叶铁线蕨孢子体走茎为材料诱导出GGB,成功的开辟了荷叶铁线蕨通过GGB的再生途径。结果表明荷叶铁线蕨诱导GGB的最适培养基为MS+BA0.5mg/L+2,4-D1.0mg/L,此时诱导率可达55.56%,而适合荷叶铁线蕨GGB增殖的培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,适合荷叶铁线蕨GGB分化的培养基为MS+ZT0.1mg/L,此时分化率达到了38.29%;并在前人研究的基础上优化了荷叶铁线蕨原叶体增殖培养基,实验得到的最适培养基为MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L。与荷叶铁线蕨相比,鹿角蕨GGB较容易诱导,且诱导得到的GGB增殖和分化率也很高。鹿角蕨诱导GGB采用的外植体为幼嫩孢子叶,且在MS+BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L和MS+BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L两种培养基上诱导率均可达到100%,实验中材料的放置方式以及叶片表面是否划伤对GGB的诱导没有影响,而适合鹿角蕨GGB增殖的培养基为MS+KT1.0mg/L+NAA0.1mg/L,在基本MS培养基中鹿角蕨GGB即可100%分化。此外,适合鹿角蕨孢子体生根的培养基为:MS+NAA0.5mg/L。最后初步确立荷叶铁线蕨和鹿角蕨的遗传转化体系:以荷叶铁线蕨原叶体为材料,预培养、共培养培养基为:MS+BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L;筛选培养基为:MS+BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L+Kan100mg/L+cef400mg/L;预培养时间为2天;共培养时间为2天;OD600=0.4,侵染时间10min;用含250mg/L Cef液体MS培养基漂洗1-2次后,将外植体接种于含250mg/L Cef固体MS再生培养基上,推迟筛选15d;然后将外植体接种于筛选培养基上进行选择培养。以鹿角蕨GGB为材料时,筛选压为Kan250mg/L+Cef250mg/L;预培养时间为2天;共培养时间为3天;OD600=0.4~0.5,侵染时间10~15min;
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