丁酸梭菌检测方法的建立及对肉鸡肠道发育的影响

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liunian2008
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随着国内外对抗生素使用监管的日趋严格和公众意识的不断提升,给畜牧业带来了严峻的挑战,抗生素替代品的研发与应用迫在眉睫。丁酸梭菌以其独特的优良特性,在抗生素替代品中发挥着重要作用。丁酸梭菌在土壤、健康动物粪便中普遍存在,因能够产生以丁酸为主要成分的有机酸而命名为丁酸梭菌,2013年丁酸梭菌被纳入《中国饲料添加剂品种名录(2013)》。本研究旨在探究培养丁酸梭菌的最适培养基、培养条件和丁酸梭菌对鸡生产性能的影响。通过备选培养基进行丁酸梭菌菌落计数筛选最适培养基,设置不同温度、p H筛选最适培养条件;通过生理生化试验对丁酸梭菌进一步鉴定,建立丁酸梭菌检测方法。为探究丁酸梭菌在肉鸡消化道内的定植力以及定植后对肉鸡肠道结构及性能的影响,选择30只健康状况良好的雏鸡,正常饲喂至20日龄后随机分为两组,对照组灌喂生理盐水,试验组灌服荧光标记的丁酸梭菌,3 h后进行解剖采集回肠上皮细胞观察;再选择20只健康状况良好的雏鸡,实验组1-6 d饲喂丁酸梭菌,正常饲喂,对照组全程正常饲喂。饲喂至16、21日龄时,分别收集回肠和盲肠中段内容物测定短链脂肪酸含量,并进行16S宏基因组分析;取21日龄肉鸡十二指肠、空肠、回肠,在显微镜下观察并测量肠绒毛高度、隐窝深度,计算绒隐比;并以500g/t的添加量进行肉鸡和蛋鸡临床试验,观察对家禽生产性能的影响。结果如下:(1)确立丁酸梭菌最适培养基为改良FTG培养基,最佳培养温度为37℃,最佳p H为7.0。(2)通过生理生化鉴定试验,发现丁酸梭菌革兰氏阳性菌,菌体呈杆状或梭状;生化反应均呈阳性;PCR成功扩增出目的条带,测序结果显示DNA序列与已知丁酸梭菌序列同源性达96%以上。(3)试验组饲喂丁酸梭菌后回肠上皮细胞周围呈现出强烈的荧光现象,表明丁酸梭菌能够在肉鸡肠道定殖。(4)在回肠和盲肠中,与对照组相比,试验组短链脂肪酸含量均显著高于对照组。(5)通过16S宏基因组检测发现16日龄样本中厚壁菌门为优势菌群,丰度最高,试验组起重要作用的微生物是Blautia菌,对照组起重要作用的微生物是梭状芽胞杆菌属和未分类毛螺旋菌属。21日龄样本中微生物种类增多,其中变形菌门、厚壁菌门和拟杆菌门为优势菌群,丰度较高;试验组起重要作用的微生物是乳酸杆菌、乳球菌属等,对照组起重要作用的微生物是诺兰克酸杆菌Gp4、未分类丛毛单胞菌科等,说明饲喂丁酸梭菌后动物肠道内有益菌属增多。(6)21日龄肉鸡肠道病理试验结果显示,在试验组的十二指肠中其空肠绒毛高度和隐窝深度两项指标与对照组比较都有明显增高(p<0.05);试验组十二指的肠绒隐比指标与对照组相比显著增高(p<0.05);说明丁酸梭菌能够促进肉鸡各段肠道发育,增强其对饲料中营养物质的吸收,有利于肉鸡的生长发育。(7)在日粮中添加500g/t丁酸梭菌全程添加,肉鸡出栏率提高0.8%,出栏日龄提前0.3天,料肉比降低0.022。实验组产蛋率较对照组提高1.4%,平均蛋重提高0.8g/枚,料蛋比降低0.06。综上,本研究发现自主研发改良FTG的培养基可作为丁酸梭菌专用培养基,其最适生长条件为37℃、p H 7.0。此外丁酸梭菌通过在肉鸡回肠上皮细胞中定植,使肠道内容物中短链脂肪酸含量增加,微生物种类增多,物种丰度比例加大,有益菌属增多,功能蛋白丰度提高,绒隐比增高,从而促进肠道功能发挥,提高鸡生产性能。
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