基于IκBα/NF-κB信号通路探讨稳消方干预动脉粥样硬化的作用机制

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目的:通过观测AS模型兔组织病理变化、血清生化指标和IκBα与NF-κB蛋白表达水平,探究稳消方防治AS的作用机制。方法:清洁级实验兔38只,将38只实验兔随机分为造模组29只、空白组9只,经实验兔耳缘静脉进行采血,检测血清中血脂指标(TC、TG、LDL、HDL)、肝功能指标(AST、ALT)、肾功能指标(Cr、BUN、UA)和肌酸激酶(CK)的水平,并称重。高脂饲料喂养进行AS造模,造模12周后,造模组随机选取实验兔2只进行取材,观察造模情况,并称重。同上测量上述血清指标。造模成功后,再次进行随机分组,将造模组分为稳消方组、辛伐他汀组、模型组,停用高脂饲料,采用标准饲料喂养,并进行药物干预。模型组按照10 ml·kg-1量每日灌胃生理盐水;稳消方组每日灌胃稳消方免煎颗粒,灌胃剂量为半夏383.33 mg·kg-1,丹皮、郁金、丹参、水蛭、地龙各575 mg·kg-1;辛伐他汀组按照0.77 mg·kg-1剂量每日灌胃辛伐他汀片,8周之后,称重,同上测量上述血清指标。麻醉取材,取腹主动脉采用免疫组化及Western blot检测IκBα蛋白及NF-κB蛋白表达情况。结果:1.病理组织的形态观察高脂饲料喂养12周后,在造模组随机处死2只,取腹主动脉,将血管内侧壁展开,肉眼可见血管内侧壁上大量乳白色的动脉粥样硬化斑块形成,苏木精-伊红(HE)染色镜下可见,细胞核蓝染,胞浆呈粉红色或红色。100×光镜下,内皮细胞增生,内膜变厚;200×光镜下,脂质堆积,泡沫细胞积聚,平滑肌细胞排列不规则,血管壁上动脉粥样硬化斑块形成,造模成功。2.TC、TG、LDL、HDL水平的观察造模12周后,造模组与空白组比较,HDL水平显著下降,血清TG、TC、LDL水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)随机将造模组分为模型组、稳消方组、辛伐他汀组,干预前三组间的血脂(TC、TG、LDL、HDL)水平差异均无统计学意义(P>0.05)。药物干预8周后,相比于模型组,稳消方组和辛伐他汀组的血清HDL水平增高,TC、LDL水平显著下降(P<0.01),TG水平下降(P<0.05)。稳消方组和辛伐他汀组两组之间的血脂指标(TG、TC、LDL、HDL)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。3.ALT、AST、Cr、UA、BUN、CK水平的观察造模12周后,与空白组比较,造模组的肝功能指标(AST、ALT)、肾功能指标(Cr、BUN、UA)和肌酸激酶(CK)的水平均明显上升,差异具有统计学意义(P<0.01)。干预前模型组、稳消方组、辛伐他汀组三组间的肝功能指标(AST、ALT)、肾功能指标(Cr、UA、BUN)和肌酸激酶(CK)的水平无差异(P>0.05)。药物干预8周后,与模型组比较,稳消方组的肝功能指标(AST、ALT)、肾功能指标(Cr、BUN、UA)的水平均显著下降(P<0.01),肌酸激酶的水平无差异(P>0.05);辛伐他汀组的肝功能指标(AST、ALT)和肌酸激酶的水平无显著差异(P>0.05),肾功能指标(Cr、BUN、UA)的水平下降(P<0.01)。稳消方组与辛伐他汀组比较,肝功能指标(ALT、AST)、肾功能指标(Cr、UA、BUN)和肌酸激酶(CK)的水平无显著统计学差异(P>0.05)。4.稳消方对IκBα及NF-κB蛋白表达的影响免疫组化和免疫蛋白印记检测结果均显示,模型组IκBα和NF-κB的表达均较空白组升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。相比于模型组,稳消方组能显著增加IκBα(P<0.01),同时抑制NF-κB(P<0.01)的表达,差异性显著。结论:1.稳消方可降低TC、LDL、TG水平,对血脂代谢具有改善作用。2.稳消方可通过增加IκBα蛋白水平,抑制NF-κB活化,减少促炎基因的过表达,对稳定斑块具有一定的作用。3.稳消方对肝功能指标(AST、ALT)、肾功能指标(Cr、UA、BUN)和肌酸激酶的水平无明显不良影响。
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