靶向沉默FOXO3a基因对K562/ADR细胞株增殖、凋亡及多药耐药影响的研究

来源 :滨州医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiguso198735
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目的:研究在慢性髓系白血病(CML)耐阿霉素(ADR)细胞株K562/ADR中,靶向沉默FOXO3a基因表达对其增殖、凋亡及多药耐药性的影响。方法:在K562和K562/ADR细胞中,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测、蛋白质印迹法(Western blot),分别检测FOXO3a mRNA和蛋白表达情况;前期构建pGHI/GFP/Neo-FOXO3a-shRNA,即靶向沉默FOXO3a基因的shRNA重组表达载体,选取脂质体法,将其稳定转入K562/ADR细胞中,RT-PCR法检测转染后FOXO3a mRNA表达水平;Western blot法检测转染后FOXO3a蛋白表达水平。通过3组分组——K562/ADR组、NC-shRNA组、FOXO3a-shRNA组来进行实验。分别取转染前二组细胞、转染后三组细胞,用CCK-8法分别检测其逆转耐药倍数。取转染后三组细胞,用流式细胞术(FCM)测其ADR平均荧光强度,即阿霉素蓄积浓度变化。结果:FOXO3a基因在CML耐药性细胞株K562/ADR中表达水平增高,即FOXO3a基因和蛋白显著增高;在含有pGHI/GFP/Neo-FOXO3a-shRNA的表达载体的K562/ADR细胞中,FOXO3a基因的mRNA及蛋白的表达水平显著下降;转染后的K562/ADR细胞的逆转倍数提高,ADR毒性在胞内增强,浓度升高(P<0.05)。结论:K562/ADR耐药性细胞株FOXO3a基因表达明显高于普通K562细胞株;靶向沉默FOXO3a基因,可以逆转CML耐药性K562/ADR细胞株的多药耐药性,为更好地改善白血病的治愈效果及预后,提供了新的基因靶点。
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