弓形虫对鸡红细胞侵染的初步研究

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刚地弓形虫作为一种专性细胞内寄生原虫,广泛寄生在绝大部分哺乳动物的除红细胞外的组织有核细胞中。鸟类和禽类作为弓形虫中间宿主,极易感染弓形虫病,国内散养鸡弓形虫感染率高达30%,人通过接触和食用感染鸡相关制品都会感染弓形虫,对人类和动物的危害不容小觑。弓形虫能感染不同宿主的不同类型有核细胞,目前对于弓形虫入侵红细胞的研究非常少,只有1980年Takada发现弓形虫能在未成熟红细胞内繁殖,他以小鼠红细胞为研究对象,研究了弓形虫在不同发育阶段体外增殖情况(Takada S,1980)。他发现刚地弓形虫能在胎鼠肝脏的有核红细胞、去核网织红细胞和血液中网织红细胞中繁殖。但鸟类和禽类作为弓形虫易感动物,其红细胞与哺乳动物红细胞相比有所不同,是有核红细胞,对于弓形虫能能否入侵有核红细胞却少有研究。本实验通过体外培养的方式,经过长时间连续观察录像弓形虫入侵有核细胞以及侵染鸡红细胞的过程,发现体外培养时弓形虫会造成鸡红细胞裂解、死亡,但不会侵入鸡红细胞内;之后通过研究温度(常用培养温度与鸡正常体温温度)和细胞种类对弓形虫入侵率的影响,发现温度不会影响弓形虫入侵率,也不会影响弓形虫造成鸡红细胞裂解和死亡;弓形虫入侵Hela细胞的入侵率较普通有核细胞慢,但不会影响入侵及增殖,说明弓形虫可能有选择性入侵;进一步通过体外共培养实验和鸡静脉攻虫实验,发现当有核细胞与鸡红细胞共存时,弓形虫会首先入侵有核细胞,继而再次证明在自然状态下,弓形虫优先入侵有核细胞,不会入侵进入鸡红细胞;通过Q-PCR检测弓形虫在侵染鸡红细胞时相关毒力因子转录水平,发现弓形虫毒力因子ROP16、ROP18和MIC3较体外培养与小鼠培养的弓形虫转录水平低,间接证明弓形虫不能入侵进入鸡红细胞;通过间接免疫荧光实验我们发现弓形虫在入侵Vero细胞时,细胞表面膜蛋白Vimentin从一开始在核周围分布,逐渐向纳虫空泡膜周围聚集,但侵染鸡红细胞时却没有这种现象,从侧面印证了弓形虫不能入侵鸡红细胞的现象。
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