ATP竞争性mTORC2抑制剂PP242对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用及GRIM-19表达的影响

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sda_xiangwei
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目的:  通过体外培养人晶状体上皮细胞(HLECs),观察ATP竞争性mTORC2抑制剂PP242对体外培养的HLECs增殖的抑制作用及干扰素/维甲酸诱导细胞凋亡相关基因19(GRIM-19)表达的影响。  方法:  对永生系HLECs系SRA01/04进行培养及传代,Cell Counting Kit-8比色法检测100,250,500,750,1000nmol/LPP242分别处理细胞株SRA01/04后12h、24h、48h细胞生长情况;将SRA01/04细胞株分为A、B、C、D组,B、C、D作为实验组分别使用100nmol/L,250nmol/L,500nmol/L PP242培养液处理,A组作为对照组使用同体积DMSO培养液处理。培养48h后应用Western blot法及实时定量RT-PCR法检测GRIM-19蛋白及其mRNA的表达情况。  结果:  100,250,500,750,1000nmol/L PP242对HLECs系SRA01/04作用12,24,48 h后,其抑制率分别为:12h组:8.59%,14.53%,19.62%,23.01%,28.80%;24 h组:10.22%,19.67%,34.92%,42.90%,46.86%;48h组:24.19%,48.13%,54.54%,61.36%,65.34%,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);100,250,500nmol/LPP242处理SRA01/0448 h后,Western blot检测结果显示GRIM-19蛋白的表达水平逐渐增强;实时定量RT-PCR检测结果显示,GRIM-19 mRNA表达增强,绝对定量mRNA结果分别为:0.700±0.112,0.994±0.128,1.584±0.173,与正常对照组(0.456±0.177)比较差异有统计学意义(P<0.05)。  结论:  ATP竞争性mTORC2抑制剂PP242对体外培养的HLECs增殖存在抑制作用,其作用强度呈剂量和时间依赖性;HLECs中存在GRIM-19的表达;PP242可通过上调GRIM-19的表达抑制HLECs的增殖。
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