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目的: 探讨靶向bcl-2、STMN1 基因干扰质粒的沉默作用、抗肿瘤效应及对肺癌紫杉醇耐药的逆转作用，进而为临床克服肿瘤耐药提供实验依据。
方法:
1.设计、构建靶向bcl-2 和STMN1 基因shRNA 的真核表达重组质粒（pGU6-GFP-neo－bcl-2、pGU6-GFP-neo－STMN1），并对上述质粒进行鉴定。
2. 用脂质体Lipofectamine 2000将四个pGU6-GFP-neo－bcl-2（b1、b2、b3、b4）和四个pGU6-GFP-neo－STMN1（s1、s2、s3、s4）重组质粒转染至A549/TAX（人肺癌紫杉醇耐药株）内，通过Real-time RT-PCR 法和Western blot 法分析bcl-2、STMN1的mRNA和蛋白变化，筛选出最有效的干扰质粒。
3. 将筛选出的bcl-2、STMN1shRNA 干扰质粒共转染至A549/TAX 内，进行免疫组化观察相应蛋白表达变化， cck-8法分析细胞增值情况，并计算出IC50以及其耐药逆转效率；用流式细胞仪和荧光显微镜分别从定量和定性两方面检测细胞凋亡情况。
结果:
1. 酶切鉴定及测序结果证实四个pGU6-GFP-neo－bcl-2（b1、b2、b3、b4）重组质粒和四个pGU6-GFP-neo－STMN1（s1、s2、s3、s4）重组质粒均构建成功。
2. 通过荧光显微镜下观察计数表达绿色荧光蛋白的细胞，及流式细胞术计数EGFP的阳性率，可以得出重组质粒能有效被转染至A549/TAX 细胞，转染率为41.3±5.2％。Real-time RT-PCR 和Western blot 结果显示：各转染组与A549/TAX细胞对照组比较，除转染阴性质粒组外， mRNA 和蛋白的表达水平均低于A549/TAX细胞对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）；其中b4、s1重组质粒对其相应基因的干扰的效果最好，b4 重组质粒对bcl-2 的mRNA 及蛋白表达抑制率分别为48.5±7.1％，38.9±5.4％；s1 重组质粒对STMN1 的mRNA 及蛋白表达抑制率分别为39.7±5.7％,42.1±5.1％。
3. 免疫细胞化学法检测A549/TAX 细胞对照组、A549/TAX 转染b4 质粒组、A549/TAX共转染b4+s1质粒组这三组的bcl-2 蛋白表达，结果显示：与对照相比，处理组的bcl-2 蛋白表达阳性率均降低（P < 0.05），蛋白表达阳性率依次为A549/TAX细胞对照组> A549/TAX转染b4质粒组>A549/TAX共转染b4+s1质粒；同法检测STMN1蛋白表达情况，结果显示：与对照相比，处理组的STMN1蛋白表达阳性率均降低（P < 0.05），蛋白表达阳性率依次为A549/TAX 细胞对照组>A549/TAX转染s1质粒组>A549/TAX共转染b4+s1质粒。
4. 不同处理组在加0.3mg/L紫杉醇（TAX）48 小时的细胞增殖抑制作用依次为：A549细胞组> A549/TAX共转染b4+s1质粒> A549/TAX转染s1质粒组> A549/TAX转染b4质粒组> A549/TAX转染阴性质粒组> A549/TAX细胞组；紫杉醇对各组细胞的半数抑制浓度(IC50mg/L)分别为：A549 细胞组0.26 ±0.018，A549 /Tax细胞组11.19±0.42， A549 /Tax转染阴性质粒组10.93 ±0.44， A549 /Tax转染b4质粒组2.63 ±0.396，A549/Tax转染s1质粒组2.37 ±0.087，A549 /Tax共转染b4+s1质粒组0.57±0.052；后三组紫杉醇耐药相对逆转效率分别为78.28％、80.71％、97.17％。
5. 各处理组细胞经Annexin V-PE染色后流式细胞分析，结果显示：A549 /Tax共转染b4+s1质粒加TAX组细胞的凋亡率、死亡率达最高，分别达41.10％、20.12％；而A549/TAX 组几乎无凋亡和死亡细胞。
6. 各组细胞经Hoechst 33342 与PI 双染后，荧光显微镜下可见A549/TAX 共转染b4+s1质粒组有较多明亮的蓝色荧光着色细胞核，染色致密，无网状结构，呈分节状或哑铃型等典型的凋亡核形态，也见少数被PI着色产生红色荧光的坏死细胞, ；而正常细胞着色很浅。
结论: 利用靶向bcl-2、STMN1基因干扰质粒进行双干扰实验，可以明显降低人肺癌紫杉醇耐药株（A549/TAX）bcl-2、STMN1 的蛋白表达；细胞增殖明显抑制，耐药指数明显下降，细胞凋亡明显增加；为进一步逆转耐药的动物实验奠定基础，进而为临床克服肿瘤耐药提供实验依据。