正常大鼠单纯门静脉血流持续阻断致肠道粘膜屏障损伤及菌群移位安全时限的实验研究 目的：研究正常大鼠单纯门静脉血流持续阻断对肠粘膜屏障功能的影响，探讨淤血-再灌注损伤后肠道粘膜屏障损伤的安全时限，为临床提供实验依据。材料与方法：将217只健康Wistar大鼠随机分为对照组、门静脉阻断20分钟(PVO-20’)、25分钟(PVO-25’)、30分钟(PVO-30’)、35分钟(PVO-35’)、40分钟(PVO-40’)组，进行门静脉血流持续阻断，造成肠道淤血；于再通后3小时、5小时、7小时、12小时、24小时、72小时分别观察动物存活情况、检测血D-乳酸、DAO和全血细菌DNA；无菌操作下留取肝脏、MLN进行组织细菌培养；留取末段回肠，光镜下观察小肠组织病理形态学变化。 结果：(1)随着肠道淤血时间的延长，动物存活减少，尤其是PVO-30’、PVO-35’、PVO-40’组术后死亡率明显增加，PVO-40’与PVO-35’比较，P＜0.05，具有显著统计学差异。 (2)肠道淤血-再灌注后血浆D-乳酸浓度均较对照组明显升高，高峰出现在再灌注后12小时，再灌注后72小时仍明显高于对照组。淤血时间越长，D-乳酸升高越明显，PVO-30’组较PVO-25’组、PVO-40’组较PVO-35’组均具有非常明显统计学差异；PVO-40’组随着再灌注时间的延长，D-乳酸浓度下降明显缓慢。 (3)肠道淤血-再灌注后血浆DAO含量均较对照组明显升高，第一次高峰出现在再灌注后5-7小时，第二次高峰出现在再灌注后24-72小时，72小时内下降缓慢。同一再灌注时间点，淤血时间越长，DAO含量越高，PVO-30’组较PVO-25，组、PVO-40’组较PVO-35’组均具有明显统计学差异。 (4)与对照组比较，肠道淤血-再灌注损伤后外周血中均可明显检测到细菌DNA片段，随着淤血时间的延长，再灌注后早期即可呈阳性，且持续存在。PVO-30’组检测阳性率明显高于PVO-25’组，PVO-35’、40’组再灌注后72小时外周血中仍可检测到细菌DNA片段。其观察结果与D-乳酸浓度变化相一致，检测到的细菌DNA片段主要以G-菌为主(BG表达阳性)。 (5)随着肠道淤血时间的延长，再灌注后肝脏、MLN组织细菌培养阳性率明显升高，其中PVO-30’组较PVO-25’组(P＜0.01)、PVO-40’组较PVO-35，组(P＜0.05)均具有明显统计学差异，其观察结果与D-乳酸浓度变化相一致；组织培养阳性细菌主要为G-杆菌(伊红美兰培养阳性)，与细菌DNA检测结果一致；同时，肠道淤血-再灌注损伤后组织细菌培养MLN明显高于肝脏(P＜0.01)。 (6)小肠组织病理形态学观察发现，淤血-再灌注早期即出现明显小肠粘膜绒毛变矮、水肿，上皮下Gruenhagens间隙增大、扩张伴随上皮层同固有层分离，伴随毛细血管淤血，间质水肿及少量炎性细胞浸润(以中性粒细胞和淋巴细胞为主)；PVO-30’、35’、40’各组出现绒毛破损伴随固有层毛细血管暴露甚至出血，炎性细胞在固有层或内皮下大量聚集，肠上皮细胞坏死、脱落，甚至肠粘膜局部溃疡形成；再灌注后72小时，PVO-40’组小肠粘膜组织损伤仍旧非常明显。 结论：①肠道组织在一定时间淤血后血流再灌注情况下可出现明显淤血-再灌注损伤，出现早、损伤程度严重、持续时间长且恢复缓慢为其特点，其主要表现为肠粘膜上皮损伤、粘膜通透性增高以及菌群移位。 ②在本实验条件下，正常大鼠单纯门静脉血流持续阻断30分钟可导致非常明显肠道粘膜屏障损伤及菌群移位，持续阻断40分钟术后死亡率明显增加，淤血-再灌注损伤很难恢复。 ③血浆DAO含量测定客观、动态反映出肠道淤血-再灌注损伤过程，其可作为检测肠屏障功能的特异性指标。