【摘 要】
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桑黄最早记载于《神农本草经》中,是一类以桑黄孔菌属(Sanghuangporus)为主的大型真菌。近些年,桑黄类真菌在抗肿瘤方面功效显著,从而得到了广泛的关注和研究。桑黄的成分有多糖类、黄酮、萜类、甾体类等,在抗肿瘤、抗氧化、神经保护、抗病毒、抗炎、抗氧化、降血糖、免疫调节等方面都有一定功效。杨树桑黄是桑黄类真菌中最易栽培、最常见的品种。2019年,杨树桑黄饮片标准正式收录于《安徽省中药药饮片炮制
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桑黄最早记载于《神农本草经》中,是一类以桑黄孔菌属(Sanghuangporus)为主的大型真菌。近些年,桑黄类真菌在抗肿瘤方面功效显著,从而得到了广泛的关注和研究。桑黄的成分有多糖类、黄酮、萜类、甾体类等,在抗肿瘤、抗氧化、神经保护、抗病毒、抗炎、抗氧化、降血糖、免疫调节等方面都有一定功效。杨树桑黄是桑黄类真菌中最易栽培、最常见的品种。2019年,杨树桑黄饮片标准正式收录于《安徽省中药药饮片炮制规范》,可进入临床使用,但饮片在临床应用仍局限于传统功效。目前杨树桑黄在免疫调节方面功效的研究还比较少,一方面本研究建立免疫低下模型来证明其在免疫调节方面的功效,另一方面建立肝癌小鼠模型初步探索研究桑黄饮片水提物联合化疗药的抗肿瘤和免疫改善作用,旨在扩大桑黄饮片的应用范围,并为临床应用提供参考。目的:建立杨树桑黄饮片的HPLC指纹图谱,一方面探讨桑黄饮片水提物对环磷酰胺所导致的免疫低下小鼠的免疫功能的影响,另一方面探讨桑黄联合氟尿嘧啶肝癌H22小鼠模型的抗肿瘤和免疫调节作用。方法:本研究以杨树桑黄饮片为原料,采用超声和沸水提取得到桑黄饮片水提物,用高效液相色谱建立其指纹图谱。给予小鼠桑黄饮片21天,在给药最后三天注射环磷酰胺造成小鼠免疫功能低下,通过测定脾脏和胸腺指数、脾脏的HE染色形态评估桑黄对免疫器官的调节作用;ELISA法测小鼠血清免疫球蛋白和细胞因子的含量,评价桑黄饮片对免疫分子含量的影响;脾淋巴细胞增殖、碳粒廓清和耳肿胀实验评价桑黄对免疫细胞功能的影响情况。皮下注射H22细胞建立荷瘤小鼠模型,记录各组小鼠瘤体积、瘤重和脾重,HE染色观察小鼠肿瘤组织和脾脏的病理变化,初步探讨桑黄联合氟尿嘧啶的抗肿瘤和免疫作用。结果:建立了杨树桑黄饮片的指纹图谱,用化学标准品明确了其中的四种成分,分别是原儿茶酸、原儿茶醛、4-(3,4-二羟基苯)-3-丁烯-2-酮、麦角甾醇。选择模型组Ⅳ的造模方式为后续实验进行造模。小鼠免疫调节功能性实验显示,模型组各项指标均显著低于正常组,表明造模成功;灌胃杨树桑黄饮片水提物的小鼠与模型组相比,小鼠脾脏和胸腺指数升高、脾脏HE染色也表明桑黄饮片水提物可以改善环磷酰胺导致的脾脏组织病理状态;小鼠血清中的免疫球蛋白含量和细胞因子水平也有显著提高;小鼠Con A/LPS脾淋巴细胞增殖程度、巨噬细胞的吞噬速率和吞噬指数、小鼠耳肿胀度均有提高。肝癌小鼠的体内实验显示,与模型组比较,氟尿嘧啶组、桑黄组与联合给药组的平均瘤重和相对肿瘤体积均显著下降,肿瘤组织HE染色显示,各给药组的肿瘤细胞的形态结构被破坏。联合给药组和氟尿嘧啶组相比,小鼠的脾指数增加,脾脏HE染色显示,桑黄可以改善化疗荷瘤小鼠脾组织病理变化。结论:该研究表明杨树桑黄饮片水提物质量稳定,对环磷酰胺所致的免疫抑制小鼠具有良好的免疫调节作用,对免疫器官损伤,免疫细胞功能降低和细胞因子分泌减少三个方面的良好的改善作用;桑黄水提物可显著抑制H22肝癌小鼠肿瘤生长,且在一定程度上增强能改善化疗小鼠的免疫功能、协同增强化疗效果。
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