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海南砂仁（Amomum longiligulare T.L.Wu）作为我国传统“四大南药”之一,有着强大的镇痛、消炎、增强免疫等作用。多糖是海南砂仁主要的活性物质之一,中药多糖具有免疫调节活性,但其属于大分子物质,存在药效作用时间短、用药量大、生物利用度低以及靶向性差等局限,这严重限制了海南砂仁多糖1（Amomum longiligulare polysaccharide 1,ALP1）在临床上的应用。聚乳酸-羟基乙酸共聚物（poly lactic-co-glycolic acid,PLGA）是人工合成的高分子聚合物,常用作可控缓释材料,具有可延长药物半衰期、提高生物利用率且无免疫原性等优点,将多糖包裹进PLGA纳米载体中,是改善这一问题的有效方法。本研究运用响应面法优化海南砂仁多糖PLGA纳米粒（Amomum longiligulare polysaccharides 1 nanoparticles,ALPP）的制备工艺,测定纳米粒的表征形态并通过细胞毒性试验、荧光定量PCR等试验方法,测定ALPP对鼠巨噬细胞和鸡外周血淋巴细胞分化、分泌细胞因子的含量,以及树突状细胞的成熟、表面活性物质的表达量和促T细胞增殖能力的影响。相较于ALP1,ALPP免疫增强效果更显著。具体试验分为以下四个部分:1响应面法优化海南砂仁多糖PLGA纳米粒的制备方法首先,采用单因素试验研究内水相与油相体积比（W1:O）、ALP1的浓度、F68的质量浓度和体积比与外水相体积比（PE:W2）对ALPP包封率的影响。根据单因素结果,采用响应面法优化纳米粒的制备工艺。同时,采用场发射电镜观察最佳制备条件下纳米粒的表征,运用激光粒度分析仪检测纳米粒的表征形态。最后,采用体外释放试验研究了纳米粒的缓释性能。结果表明,W1:O为1:7、PE:W2为1:7和F68的质量浓度为0.7%是ALPP最佳制备条件,在此条件下包封率高达79.88±0.47%。此外,ALPP是表面光滑、大小均匀的球形颗粒,直径为389.77±27.94 nm,电势为-18.1±0.26 m V。体外释放结果表明,ALPP累计释放百分率明显低于ALP1,说明ALPP不易分解,具有较强的缓释作用。2海南砂仁多糖PLGA纳米粒对小鼠单核巨噬细胞的影响首先,采用细胞毒性试验测定ALP1、BP和ALPP对小鼠单核巨噬细胞的毒性。随后运用流式细胞术检测药物对巨噬细胞吞噬活性的影响。ELISA法检测药物对巨噬细胞中i NOS的活性和NO、IL-6、IL-10、TNF-α和TGF-β分泌量的影响。结果表明,PLGA纳米外壳可以降低ALP1的药物毒性,还能显著增强巨噬细胞的吞噬活性。在药物浓度作用范围内,ALPP增强巨噬细胞中i NOS的活性和促进NO和细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β的分泌的效果显著强于ALP1。综上所述,ALPP对巨噬细胞的毒副作用低于ALP1,并且增强巨噬细胞活性和促进其分化的能力比ALP1更强。3海南砂仁多糖PLGA纳米粒对鸡外周血淋巴细胞的影响首先,采用细胞毒性试验测定ALP1、BP和ALPP对鸡外周血淋巴细胞的毒性。随后体外淋巴细胞增殖试验检测药物对淋巴细胞增殖的影响。应用qRT-PCR技术进一步研究药物对淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γmRNA表达量的影响。结果表明,药物浓度作用范围内,ALP1和ALPP均未抑制鸡外周血淋巴细胞的活性。与PHA组相比,ALP1刺激淋巴细胞中IL-2和IFN-γmRNA相对表达量分别为3.85倍和3.50倍,ALPP组促进淋巴细胞合成IL-2 mRNA相对表达量为6.05倍,以及IFN-γ的表达量增高到7.18倍。综上所述,相较于ALP1,ALPP对淋巴细胞功能增强的作用得到明显提升。4海南砂仁多糖PLGA纳米粒对树突状细胞的影响首先,采用MTT法测定ALP1、BP和ALPP对鸡骨髓源树突细胞的细胞毒性和增殖能力的影响。采用qRT-PCR技术检测表面分子表达量来研究药物对树突状细胞的成熟度和活性的影响。随后观测药物对树突状细胞摄取能力的影响。同时,检测药物对树突状细胞刺激T淋巴细胞增殖能力的影响。结果表明,药物浓度作用范围内,相较于ALP1,ALPP显著性增强树突状细胞的活性、促进其增殖、提高其摄取能力以及刺激T淋巴细胞增殖的能力。同时,与ALP1组mRNA相比,ALPP促进树突状细胞表面分子CD11.c、CD40、CD86、CD80、CD83和MHC II类分子mRNA的表达量升高量为55.33±0.12%,62.00±0.03%,26.67±0.02%,51.67±0.12%,41.68±0.03%,42.64±0.01%。综上所述,将ALPP对树突状细胞的活性增强作用和成熟作用均强于ALP1。本研究结果表明,相较于ALP1,ALPP不仅能显著增强巨噬细胞活性,促使巨噬细胞极化为M1型和M2型,还能显著提高淋巴细胞细胞因子的表达水平,诱导T淋巴细胞向Th1型淋巴细胞分化,并且ALPP也能显著地提高树突状细胞的活性、成熟、摄取能力、抗原递呈能力、促进T淋巴细胞增殖的能力。PLGA外壳能降低ALP1的毒副作用,使ALPP的免疫增强效果远强于ALP1。因此,ALPP是一种极具发展潜力的免疫调节剂。