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目前恶性肿瘤已经成为严重危害人类健康的重大疾病,而化疗药物普遍存在抗肿瘤选择性差和毒副作用大的缺点,导致治疗效果不理想,给患者带来极大的痛苦。因此,如何提高肿瘤患者的生活质量,如何提高抗肿瘤药物的靶向性及其治疗效果成为肿瘤治疗的首要命题。叶酸(FA)与其受体的结合具有一定的特异性和选择性。近年来,利用叶酸受体在某些肿瘤部位的表达远高于其在正常组织的表达的特性,形成了一种叶酸修饰的靶向给药系统,这种抗肿瘤传递机制倍受广大科研工作者的亲睐。纳米给药系统由于其可以控制释放药物而引起广泛关注,其中具有良好生物相容性、生物可降解性的壳聚糖是常用的载体材料。另外,聚乙二醇(PEG)是一种亲水性高分子,用于修饰给药系统后能增加体内循环时间。
本研究目的在于开发一种稳定、粒径可控的纳米粒,并对其进行叶酸和PEG功能化修饰,载药后使其成为一种安全、长循环、可主动靶向肿瘤组织的抗肿瘤给药系统。主要内容包括：⑴采用双交联法即离子交联法结合化学交联法制备粒径可控、稳定性较好的壳聚糖纳米粒子,考察多聚磷酸钠与壳聚糖的质量比、反应时间和pH值对纳米粒子粒径的影响；研究戊二醛投入量对纳米粒子形态和表面氨基数量的影响。⑵通过活化叶酸(FA)改性PEG修饰纳米粒子,使其具有主动靶向和长循环的特性,通过红外光谱法进行结构验证；最后接枝丝裂霉素(MMC),并考察其体外释药特性。⑶通过细胞毒性试验(MTT),激光共聚焦荧光显微镜观测和对荷瘤小鼠的肿瘤抑制率试验,验证FA-PEG修饰的壳聚糖纳米粒子的靶向性、长循环性以及对肿瘤的抑制作用。⑷通过药代动力学实验,研究FA-PEG修饰的壳聚糖载药纳米粒子在大鼠体内的动态代谢特征。研究表明：①利用双交联法成功制备出粒径可控在200～500nm,性能稳定的壳聚糖纳米粒子。②经FA和PEG共同修饰,并载有丝裂霉素的壳聚糖纳米粒子,其载药量为9.73％、包封率为21.58％,体外释药行为呈现速释和缓释的双相特征。③MTT结果显示FA-PEG修饰的壳聚糖载药纳米粒子具有较高的细胞毒性,并随着时间的延长,细胞毒性逐渐增加。激光共聚焦试验结果也表明:FA修饰能增加粒子被He/Ta细胞摄取的能力。而体内抑瘤率试验结果显示:载药纳米粒子与原料药的抑瘤率相似,达到31.4％,但是FA-PEG修饰的载药纳米粒子能显著降低药物的全身毒副作用。④药代动力学试验结果显示:FA-PEG修饰的壳聚糖载药纳米粒子的药-时曲线下面积(AUC)、表观分布容积(Vd)和半衰期(t1/2)均大于MMC注射剂,而且其总清除率(CL)小于MMC注射剂。说明MMC制备成纳米粒后,具有一定的缓释效果和长循环作用。