本文对β-酪啡肽-5（β-casomorphin-5，β-CM5）对糖尿病大鼠降糖作用及其氧化应激的影响进行了初步探讨。研究包括以下三个部分：　　 试验一β-CM5对大鼠肠道葡萄糖吸收的抑制及其机制　　 为了探讨β-CM5对大鼠小肠葡萄糖吸收的影响。研究利用翻转的离体小肠模型，通过测定60min内不同浓度β-CM5各试验组肠囊内葡萄糖含量及葡萄糖的转运率；测定离体肠道黏膜α-葡萄糖苷酶、Na+-K+-ATP酶活力，以及对小肠葡萄糖转运载体SGLT-1及GLUT-2 mRNA表达水平的分析，揭示β-CM5对葡萄糖吸收影响及机制。结果显示：（1）不同浓度β-CM5肠囊内葡萄糖的转运量及转运率均显著低于对照组；（2）β-CM5组小肠黏膜中α-葡萄糖苷酶活力显著低于对照组；（3）β-CM5组小肠黏膜中SGLT-1、GLUT-2mRNA表达量与对照组相比均显著性下调，且与对照组相比β-CM5明显抑制Na+-K+-ATP酶活力。结论：β-CM5可以通过抑制葡萄糖吸收的相关酶活及下调葡萄糖转运载体的mRNA表达，从而抑制肠道葡萄糖的吸收。提示：β-CM5可能具有降糖作用。　　 试验二β-CM5对糖尿病大鼠血糖和抗氧化作用的影响　　 为了探讨灌胃β-CM5对链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病（DM）大鼠血糖和抗氧化能力的影响。研究选用SD雄性大鼠60只，随机取50只用来制造糖尿病大鼠模型，另10只作为正常对照组。糖尿病模型组大鼠按60mg/kg一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）溶液（给药前大鼠禁食过夜），正常对照组大鼠按同样方法腹腔注射等体积生理盐水（NS）。分别于注射STZ后72h剪尾取血，血糖仪测定所有大鼠的空腹（禁食8h）血糖水平。以空腹条件下血糖值≥11.1 mmo1/L为高血糖造模成功。取造模成功大鼠40只，随机分为高剂量（H）组（7.5×10-5mol/Lβ-CM5）、中剂量（M）组（7.5×10-6mol/Lβ-CM5）和低剂量（L）组（7.5×10-7mol/Lβ-CM5），每12h灌胃β-CM5溶液1mL，糖尿病模型对照（DM）组和正常对照（CON）组大鼠按等体积生理盐水灌胃。每天观察大鼠饮水、采食量等，每5天测空腹血糖1次。连续灌胃25d后，断颈处死，取血清、肝脏及肌肉等进行如下试验：1）血糖含量的测定；2）肝、肌糖原及血清中胰岛素及胰高血糖素含量的测定；3）血清中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性的测定。结果发现：1）β-CM5能显著改善糖尿病大鼠多饮、多食等状况；2）连续灌喂β-CM5大鼠血糖浓度均有降低，灌胃20d后大鼠血糖水平明显低于DM组大鼠；3）与DM组相比，β-CM5各剂量组大鼠的肝糖原和肌糖原含量均有升高；血清胰岛素、胰高血糖素水平无明显差异；4）连续灌喂β-CM5能显著提高大鼠SOD酶及GSH-Px酶活性，降低MDA含量。结论：β-CM5有一定的辅助降血糖功效，连续灌胃能降低糖尿病大鼠血糖水平，提高肝糖原、肌糖原含量，增强机体抗氧化应激能力。　　 试验三β-CM5抗氧化损伤作用的细胞学研究　　 C2C12细胞是体外研究氧化应激损伤的最常用细胞模型，我们上一章的结果显示，β-CM5可以提高糖尿病大鼠抗氧化损伤的能力，本试验我们通过建立过氧化氢（H2O2）对C2C12肌细胞的氧化损伤模型，探讨β-CM5对H2O2诱导的C2C12肌细胞氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法：1）MTT法测定72h内β-CM5对C2C12细胞活力的影响，筛选作用于肌细胞的安全剂量；2）MTT法测定不同浓度H202对C2C12细胞活力的影响，筛选作用于肌细胞的H2O2的最佳剂量与作用时间；3）MTT法测定13-CM5对H2O2损伤细胞后的细胞活力的影响；4）检测培养液中超氧化物歧化酶SOD、乳酸脱氢酶LDH的活性。结果显示：1）β-CM5各浓度组MTT值与对照组相比并无差异；2）0.25 mmol/L的H2O2作用于C2C12肌细胞1 h后，MTT值便显著低于对照组（0.31±0.01，P<0.01）；3）β-CM5预保护组的MTT值显著高于损伤组（0.53±0.01，P<0.05），β-CM5治疗组的MTT值与损伤组相比无显著差异（0.71±0.01，p>0.05）；4）与损伤组相比，β-CM5保护组的SOD活性均显著提高（10.18±0.35，P<0.05），LDH活性显著下降（397.34±15.96，P<0.05）。提示，β-CM5对H2O2损伤后的肌细胞有预保护作用，其机制可能与增强抗氧化酶活性，维持细胞完整性有关，但详细机理有待进一步研究。