论文部分内容阅读
以体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transplantation, IVF-ET)为中心的辅助生殖技术近年来迅速发展，在临床得到了广泛的应用。然而ET胚胎着床障碍依然是限制此项技术发展的瓶颈。因此寻找提高超排卵(controlledovarian stimulation, COS)后胚胎着床率的药物以及对着床机制的探讨成为生殖领域的热点问题。本研究运用COS着床障碍动物模型筛选促孕复方促着床活性物质，对活性成分作用机制进行分析研究，同时对活性成分DS147进行初步质量控制研究。一促孕复方促进胚胎着床活性物质筛选对促孕复方进行梯度极性系统的萃取和柱层析分离，运用COS着床障碍动物模型筛选促着床活性成分。将受孕小鼠随机分为正常组、模型组和给药组，采用COS诱导小鼠胚泡着床障碍，给予促孕复方不同极性部位及部位活性成分进行干预，于妊娠第8天(PD8)处死小鼠，观察妊娠率及平均着床点数。结果显示促孕复方乙酸乙酯部位可将着床障碍小鼠妊娠率提高至50%(P <0.05)，乙酸乙酯部位活性成分DS147可将着床障碍小鼠妊娠率提高至83.3%(P<0.01)，且未发现对正常妊娠有不良影响。促孕复方有效部位活性成分DS147能更显著地提高超排卵后的妊娠率，促进着床障碍小鼠胚胎着床。二促孕复方活性成分DS147促着床机制研究采用COS诱导小鼠胚泡着床障碍，给予有效部位活性成分DS147进行干预，于PD5天处死小鼠。从黄体发育，子宫内膜蜕膜化，基质降解，血管渗透性，血管生成以及胎盘发育等方面来探讨DS147促着胚胎着床的机制。结果表明该活性物质的促着床作用与提高基质金属蛋白酶2(matrix matalloproteinases, MMP-2)表达，抑制金属蛋白酶组织抑制物(tissue in-hibitor of metalloproteinases, TIMP-2)表达从而促进基质降解，促进血管生成相关因子CD34，血管生成素(angiogenin,ANG)表达促进血管生成，改善卵巢黄体溶解，促进子宫内膜蜕膜化以及胎盘发育密切相关。DS147能显著改善超排卵后受损伤的子宫内膜及卵巢发育，提高妊娠率。三促孕复方活性成分DS147有关物质含量测定和质量标准研究建立促孕复方DS147中总黄酮，总皂苷，总多糖的紫外含量测定方法和质量标准。总黄酮的含量采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法在505nm波长处测定，总皂苷采用5%香草醛冰醋酸-高氯酸比色法在540nm波长处测定，总多糖采用苯酚-浓硫酸比色法在490nm波长处测定。采用薄层色谱法(TLC)对活性成分DS147中黄芪，黄芩，续断进行定性鉴别；用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定黄芪甲苷的含量。结果表明促孕复方DS147中总黄酮、总皂苷、总多糖的含量分别为33.78%，40.42%和9.36%；相对标准偏差RSD分别为1.36%，2.35%，0.69%。黄芪甲苷的含量为0.331%，RSD=1.01%。紫外含量测定方法简便准确，可用于DS147的含量测定方法。TLC定性鉴别专属性强，HPLC-ELSD灵敏度高，可用于促孕复方DS147的质量控制。