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紫外线B (UV-B)作为一种重要的环境信号调控着植物的生长发育,但目前对其信号转导机制却知之甚少。动物细胞中研究已表明异三聚体G蛋白参与了UV-B辐射信号的传递,但G蛋白是否也参与植物细胞响应UV-B信号的传递却并不清楚。在植物气孔运动的研究中,许多证据表明G蛋白参与了脱落酸、胞外钙调素、病源激发子和臭氧等多种刺激调控气孔运动的信号转导过程,且其作用是调控信号分子过氧化氢(H202)和一氧化氮(NO)的形成。在UV-B调控气孔运动的研究中,前期研究已表明H202和NO参与了UV-B诱导气孔关闭的信号转导过程,但对于(1)UV-B诱导H202和NO形成的具体酶学途径;(2)G蛋白是否参与该UV-B信号转导过程;(3)G蛋白与H202和NO的关系等一系列问题均不清楚。本研究结合药理学、遗传学和细胞生物学的研究方法,以模式植物拟南芥为材料,对上述问题进行了研究,得到以下主要实验结果和结论:1.以野生型拟南芥叶片为材料,当UV-B辐射强度达到0.5W·m-2时诱导气孔关闭最为显著,且该剂量UV-B在辐射3h后气孔关闭程度最显著,说明0.5W·m-2UV-B辐射处理3h是诱导拟南芥叶片气孔关闭的最适辐射剂量和处理时间,故以下实验均采用该UV-B辐射强度处理3h。2.G蛋白抑制剂百日咳毒素(PTX)能显著抑制0.5W·m-2UV-B诱导的气孔关闭,而其活化剂霍乱毒素(CTX)能模拟UV-B的作用诱导可见光下叶片气孔关闭;UV-B辐射不能诱导G蛋白α亚基GPA1的功能缺失突变体gpal-1和gpal-2的气孔关闭,却能诱导GPA1基因过表达株系wGa和其组成活化型株系cGa的气孔关闭,且cGa和wGα在UV-B辐射下气孔关闭速度明显快于野生型。表明异三聚体G蛋白α亚基参与了UV-B辐射诱导拟南芥气孔关闭的信号转导过程。3.H202的清除剂抗坏血酸(ASA)和过氧化氢酶(CAT)以及NADPH氧化酶抑制剂二苯基碘(DPI)均能显著抑制UV-B诱导拟南芥野生型气孔关闭和保卫细胞H202的生成;但UV-B不能诱导NADPH氧化酶AtrbohD和AtrbohF的功能缺失单突变体和双突变体的气孔关闭和保卫细胞H2O2的生成。说明H2O2参与了UV-B诱导拟南芥气孔关闭的过程,且H2O2的形成依赖于NADPH氧化酶AtrbohD和AtrbohF。4.PTX能显著抑制UV-B诱导保卫细胞H2O2的形成,外源H2O2也能逆转PTX对UV-B诱导气孔关闭的抑制效应;CTX能诱导可见光下保卫细胞H2O2的生成,且其诱导的H202的生成和气孔关闭均可被ASA、CAT和DPI抑制;UV-B不能诱导突变体gpal-1和gpal-2的保卫细胞形成H202,却能使cGa和wGa保卫细胞H202形成量高于野生型;外源H202能诱导可见光和UV-B辐射下突变体gpal-1和gpal-2的气孔关闭,CTX也不能诱导NADPH氧化酶AtrbohD和AtrbohF的功能缺失单突变体和双突变体的气孔关闭和保卫细胞H202的生成。上述结果表明在UV-B诱导气孔关闭的信号转导过程中Ga作用于H202的上游。5.NO清除剂c-PTIO和硝酸还原酶(NR)抑制剂钨酸钠均能抑制UV-B诱导的拟南芥野生型气孔关闭和保卫细胞NO的形成;但UV-B辐射不能诱导NR单突变体nial和双突变体nialnia2的气孔关闭和保卫细胞NO的形成,却能诱导NR单突变体nia2气孔关闭和保卫细胞NO的形成。该结果不仅再次证明NO参与了UV-B诱导气孔关闭的信号转导过程,而且进一步表明UV-B诱导的NO依赖于Nial,而不依赖于Nia2。6.PTX能抑制UV-B诱导保卫细胞NO的形成,外源NO供体硝普钠(SNP)也明显逆转PTX对UV-B诱导气孔关闭的抑制效应;CTX能诱导可见光下保卫细胞NO的生成,且其诱导的NO的生成和气孔关闭均可被c-PTIO和钨酸钠显著抑制;UV-B不能诱导突变体gpal-1和gpal-2的保卫细胞形成NO,却能使cGa和wGa保卫细胞NO形成量高于野生型;SNP能诱导可见光和UV-B辐射下突变体gpal-11和gpal-2的气孔关闭,CTX却不能诱导突变体nial和nialnia2的气孔关闭和保卫细胞NO的生成。上述结果表明UV-B诱导的保卫细胞NO形成依赖于Gα。7.外源H202不能诱导可见光和UV-B辐射下突变体nial和nialnia2的气孔关闭,而SNP却能促使可见光和UV-B辐射下NADPH氧化酶AtrbohD和AtrbohF的功能缺失单突变体和双突变体的气孔关闭;UV-B辐射不能诱导NADPH氧化酶AtrbohD和AtrbohF的功能缺失单突变体和双突变体的保卫细胞形成NO,却能诱导突变体nial和nial/nia2保卫细胞形成H202。该结果表明UV-B诱导气孔关闭的信号链中H202在NO的上游发挥作用。综上所述,本文结果阐明拟南芥叶片保卫细胞接受0.5W·m-2UV-B刺激后,启动了一个包括Gα、H2O2和NO的链式信号转导途径,该途径导致了气孔关闭。在该途径中,首先UV-B活化了异三聚体G蛋白的α亚基Ga,活化的α诱导了NADPH氧化酶AtrbohD和AtrbohF途径来源的H202产生,产生的H202又诱导了Nial途径来源的NO形成,形成的NO进而导致气孔关闭。该结果不仅丰富了植物异三聚体G蛋白的生物学功能,而且有助于人们深入理解植物细胞响应UV-B辐射这一重要环境因子的信号转导机制。