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偃麦草属植物是改良小麦不可缺少的野生基因库,其中有些种质耐盐碱能力特别强,是进行固土护坡、水土保持、改良盐碱地、三江源综合治理等生态环境建设的理想植物。本试验在对大量偃麦草种质进行全面系统搜集整理基础之上,进行SSR分析,以期揭示其遗传特性,最终目的是为进一步深入研究和高效发掘偃麦草优异耐盐基因源提供科学理论依据和技术支撑,从而加快偃麦草和小麦耐盐新品种选育进程。
本试验以偃麦草属植物为研究对象,利用SSR分子标记,对部分已知的六倍体偃麦草进行遗传多样性的分析,结果如下:
1、采用CTAB法提取符合SSR标记要求的偃麦草属植物总DNA,选用53对在小麦和偃麦草研究中应用的引物对90份偃麦草材料进行了PCR扩增分析,建立偃麦草SSR标记扩增体系及扩增程序。
反应体积为20 μL(10×PCR Buffer 2μL,25mmol/L MgCl<,2>2μL,100pmol/L引物5μL,10mmol/L dNTP 0.4μL,Taq酶5U/μL 0.2μL,DNA模板2μL,加ddH<,2>O到20μL)。
反应程序为94℃预变性4分钟,94℃变性30秒,57℃退火1分钟,72℃延伸1min,共33个循环,72℃延伸10min后4℃保存。
2、从53对引物中筛选出适宜SSR标记的10对引物:Xgwm033、Xgwm044、Xgwm071、Xgwm153、Xgwm190、Xgwm257、Xgwm295、.Xgwm314、Xgwm518、Xgwm642。
3、通过树状聚类分析图,可以看出材料间的亲缘关系的远近。18份材料之间相似性系数变化范围不大,在0.1667-0.4941之间。整体遗传差异不大,说明原先材料的划分是合理的。
(1)偃麦草ER008与ER027聚合又与ER028聚合,长穗偃麦草EE008与Elytrigia caespitosa(EC001)聚合后又与长穗偃麦草EE021相聚;这两组关系较近。
(2)中间偃麦草E1020与中间偃麦草E1028先聚在一起,再与中间偃麦草E1026聚合;中间偃麦草EI039与中间偃麦草E1040聚在一起;这两组关系也较近。
(3)杂交偃麦草EH002与Elytrigia pycnantha(EPY01)聚到一类,再与Elytrigia pungens(EPU02)聚在一起。
(4)偃麦草ER035与偃麦草ER041聚到一起,再与ER045归为一类。中间偃麦草E1032最终与17份偃麦草聚在一起。