米糠蛋白ACE抑制肽分离纯化工艺的研究

来源 :黑龙江八一农垦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qq81194913
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以米糠蛋白为原料,为有效提高米糠附加值,增加米糠产品,本试验以米糠蛋白为原料制备米糠ACE抑制肽。采用超滤、大孔吸附树脂、SephadexG-15葡聚糖凝胶层析对米糠ACE抑制肽进行分离,最后得到高活性米糠ACE抑制肽。对分离后的各个组分利用高效液相色谱法分析以及ACE活性的研究。主要研究内容、结论如下。1、通过酶的筛选试验确定复合蛋白酶的第一种酶。其余四种酶作定位为第二种水解酶。研究结果表明,碱性蛋白酶+风味蛋白酶底物浓度5%水解,通过L9(34)正交试验得到最佳优化组合,其结果为温度50℃,pH 10.0,水解时间2.5 h,加酶量[E]:[S]为3.0:100。在这些条件下米糠ACE肽抑制率为86.52%。2、分离纯化首先选用超滤膜1000 u和3000 u对米糠蛋白水解液进行分子量截留,经过超滤过后的米糠蛋白水解液的ACE抑制活性比超滤之前明显提高。3、采用大孔吸附树脂对米糠ACE抑制肽进行分离,结果表明,筛选出HPD-400树脂最适合米糠蛋白中肽的混合物的纯化。通过对影响树脂吸附解吸的各种因素进行系统的研究,确定的工艺参数。HPD-400树脂对米糠多肽的静态吸附4 h左右基本达到吸附平衡,选择45℃的吸附温度度较为适宜;吸附时间达到2 h后HPD-400树脂树脂对米糠蛋白肽的吸附量已达到饱和;在pH 4.0时吸附效果好,吸附率达85.4%。解吸液为pH 8.0的70%乙醇溶液。洗脱液时间的确定为30min。HPD-400树脂分离前后的ACE抑制率从85.67%升高到91.76%,盐含量变化显著从HPD400树脂脱盐之前的19.9%降低到1.80%。4、试验研究了Sephadex G-15分离米糠蛋白水解物,综合分析,以去离子水作为洗脱液,流速0.8mL/min时,上样浓度在200 mg/mL时,分离效果最佳。分离组分经高效液相色谱法测定后,通过分子量分子量标准曲线确定分离的活性组分分子量范围在730990 u,ACE抑制率达到了92.5%。5、试验研究了加热温度、pH、胃蛋白酶和胰凝乳酶蛋白酶对米糠ACE活性肽的影响试验,试验结果表明,温度在0℃,pH在8时的ACE抑制率最高,高活性米糠ACE抑制肽可以在胃肠道中保持很高的活性。
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