研究目的:睑裂狭小综合征是一类以双侧睑裂狭小、内眦间距增宽、上睑下垂及倒向型内眦赘皮为主要疾病特点的先天性眼睑畸形。根据是否合并卵巢功能早衰分为两型:Ⅰ型女性患者合并有卵巢功能早衰,常导致不育;Ⅱ型患者仅有眼睑畸形,不合并卵巢功能早衰。FOXL2基因突变是引起睑裂狭小综合征最主要的原因,且基因突变类型与表型之间的研究对于Ⅰ型睑裂狭小综合征的女性患者更为重要。本研究针对一个类型尚不清楚的睑裂狭小综合征的家系,进行基因型鉴定及临床表型分析。材料和方法:对睑裂狭小综合征家系家族成员进行临床表型分析与基因型鉴定,选取突变位点进行致病性预测,并通过构建突变质粒对下游关键基因表达及功能进行鉴定,共聚焦显微镜确定突变蛋白在细胞内的定位,Realtime检测基因表达,荧光素酶报告基因检测突变蛋白对下游基因调控作用,EMSA检测突变蛋白与基因结合情况,确定突变类型并对疾病表型做出预测。研究结果:本研究中的睑裂狭小综合征家系中,共有14名家庭成员,其中有2名男性患者、2名女性患者。家族中两位女性患者均未成年,因此目前疾病临床分型未知。该家系患者FOXL2基因发生的突变为c.634＿640 del CCCATGC,Y215Pfs*54,是一种全新突变。Realtime结果显示该突变所产生的突变蛋白不能促进下游基因OSR2、SIRT1的表达,不能抑制下游基因St AR表达;荧光素酶报告基因显示突变蛋白不能对St AR产生抑制;EMSA实验显示突变蛋白不能与St AR结合。研究结论:该睑裂狭小综合征家系中,患者发生的突变为FOXL2基因缺失突变c.634640 del CCCATGC,Y215Pfs*54,是一种全新的FOXL2突变,该突变所产生的突变蛋白影响下游OSR2、SIRT1、St AR基因表达,并对St AR基因失去调控作用,可能导致卵巢功能早衰,所导致的患者的临床表型预测为Ⅰ型。研究目的:肿瘤干细胞（Cancer Stem Cell,CSC）是一类具有干细胞特性,能够自我更新和分化,维持自身致瘤性的细胞,是肿瘤发生、肿瘤转移及耐药性产生的重要原因,针对肿瘤干细胞的研究将有望彻底解决肿瘤转移及耐药的问题。近来,表观遗传领域的研究逐渐得到重视,其中长非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）不仅与肿瘤发生密切相关,而且在肿瘤干细胞干性调控中扮演重要角色。Hotair M1是一条与发育密切相关的lnc RNA,目前在肿瘤干性调控中研究尚属空白。本研究拟从表观遗传学角度探究Hotair M1在肿瘤干细胞干性调控中的作用,明确下游靶点,阐明Hotair M1介导靶基因干性调控的机制,提供针对肿瘤干细胞靶向治疗的新思路。材料和方法:流式分选得到特异性标记物标记的肿瘤干细胞,Realtime检测Hotair M1的表达量。构建Hotair M1敲除及过表达的稳转系,利用体外成球实验,有限稀释实验,干性蛋白检测等方法检测lnc RNA调控肿瘤干细胞比例的作用,通过CCK8、平板克隆、transwell及软琼脂克隆形成实验检测Hotair M1对肿瘤表型的作用。小鼠皮下成瘤实验鉴定肿瘤干细胞比例及肿瘤生长特性。染色体免疫沉淀、寡核苷酸免疫沉淀等表观遗传学方法,检测Hotair M1与下游靶基因HOXA1的相互作用关系,提出调控模型。研究结果:肿瘤干细胞中Hotair M1为普遍性低表达,Hotair M1敲低可促进肿瘤干细胞比例,进而促进肿瘤增殖迁移及成瘤;Hotair M1过表达后可以明显降低肿瘤干细胞的比例,抑制肿瘤增殖迁移及成瘤。HOXA1是Hotair M1的下游靶点,抑制HOXA1表达能显著抑制肿瘤干细胞的比例,抑制肿瘤的增殖和迁移能力。Hotair M1可与HOXA1启动子区结合,敲除Hotair M1后可在HOXA1启动子区招募PRC2复合物,促进组蛋白H3K27甲基化,抑制HOXA1表达。研究结论:结肠癌及葡萄膜黑色素瘤肿瘤干细胞中Hotair M1为低表达,具有抑制肿瘤干性的作用。Hotair M1敲低后可在下游靶基因HOXA1启动子区招募PRC2复合物,促进组蛋白H3K27三甲基化,抑制靶基因HOXA1表达,从而促进肿瘤干性增加。