褐藻多酚抗黑色素合成和抗光老化活性研究

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褐藻多酚是一类仅存在于海洋褐藻中的次级代谢产物。近年来,褐藻多酚因其广泛的生物活性且天然、无毒而受到研究者们的大量关注。本研究从羊栖菜(Sargassum fusiformis)和鼠尾藻(Sargassum thunbergii)中提取褐藻多酚,并对褐藻多酚的抗氧化活性、抗衰老活性、抗黑色素生成以及光保护作用展开研究,以期为褐藻多酚在化妆品中的应用提供理论支持。本文首先以羊栖菜为原材料,在40%乙醇、70℃水浴条件下浸提两次得到粗提物(SFPA),利用XDA-7大孔吸附树脂分离纯化粗提物得到羊栖菜多酚(SFPR),同时利用乙酸乙酯萃取羊栖菜粗提物得到乙酸乙酯相多酚(SFPE)和水相多酚(SFPW),体外检测了 SFPA、SFPR、SFPE、SFPW四种多酚的抗氧化、抗衰老和抗酪氨酸酶活性。体外抗氧化结果表明SFPR、SFPE具有较强的抗氧化活性。以弹性蛋白酶和胶原蛋白酶为对象检测四种多酚的抗衰老活性,结果显示SFPA、SFPR、SFPE三种多酚均能有效抑制弹性蛋白酶的活性;四种多酚均有很强的胶原蛋白酶抑制作用,其中SFPR的抑制作用效果最好。以mTYR为对象测定SFPR、SFPE对mTYR活性抑制作用。结果显示两种多酚都能够显著抑制mTYR的活性,其单酚酶IC50分别为2.02和3.20 μg/ml,二酚酶IC50依次为3.89、0.89μg/ml。其次研究了 SFPR、SFPE对二酚酶的抑制机理和抑制类型,SFPR为混合型可逆抑制,其抑制常数(KI)和抑制解离常数(KIS)分别为5.54 μg/ml、11.25μg/ml。SFPE对二酚酶的抑制机理为不可逆抑制。在体外mTYR活性抑制的基础上,研究了 SFPR对B16F10细胞中黑色素生成的影响。结果表明,SFPR能有效抑制细胞中黑色素的形成和TYR的活力。进一步的研究表明,SFPR通过抑制CREB信号通路来下调MITF的表达,进而抑制TYR家族蛋白的表达,从而抑制B16F10细胞中黑色素的合成。其次,本研究分离纯化获得鼠尾藻多酚提取物(STPE),并对其光保护作用进行了研究。体外研究证明STPE对UVB诱导的L929细胞光老化损伤具有保护作用。STPE以剂量依赖性的方式降低细胞内ROS的含量,提高UVB辐射后L929细胞内SOD的活性,提高细胞的抗氧化活性。STPE浓度在40 μg/ml时能够显著降低细胞内MDA的含量,有效缓解紫外辐射造成的氧化损伤。同时STPE可缓解UVB辐照后L929细胞的DNA凝集现象。进一步,我们研究了 STPE对UVB诱导的L929细胞内炎症因子和MMPs的影响,结果表明,STPE通过影响NF-κB信号通路抑制炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA或蛋白水平的表达,但STPE对MMPs的表达无明显抑制作用。此外,本研究以UVB辐照斑马鱼为模型研究了 STPE对斑马鱼皮肤损伤的修复作用,结果表明,STPE显著修复UVB辐射后受损斑马鱼的尾鳍面积,且能有效清除斑马鱼体内过多的ROS。以上结果表明STPE具有显著抗光老化的作用。最后,本研究通过MTT法测定SFPR和STPE对3D皮肤模型活性的影响,结果表明100 mg/mL SFPR和STPE不具有皮肤刺激性。
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