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抗球虫药物包括聚醚离子载体类和化学合成类两种类型,可用作饲料预混剂,在球虫病的预防和治疗中发挥着重要的作用。尽管抗球虫药物在球虫病的防治中效果显著,但其长期、连续的在饲料中添加,或者不规范的使用,极易造成药物在动物源性肉制品及蛋或者奶制品中出现残留,影响食品安全和公共卫生安全,进而威胁消费者健康。因此多个国家纷纷制定了抗球虫药的最大残留限量标准(MRLs),对相关的分析检测技术也提出了更高的要求。本研究以莫能菌素(Monsensin,MON)和马度米星铵(Maduramicin ammonium,MD)两种聚醚类离子载体抗生素为检测对象,制备出高灵敏度、高特异性和高亲和力的单克隆抗体,并以其为识别元件,以金属有机骨架材料(MOFs)复合材料为电极修饰材料或信号探针,构建出电化学免疫传感器,集抗体的高特异性和电化学分析方法的高灵敏度于一体,实现MON和MD的快速、灵敏的检测。课题研究的具体内容包括以下几个方面:(1)合成了MON人工抗原(免疫原)MON-BSA和包被原MON-OVA。MON-BSA具有优异的免疫原性,能刺激小鼠产生抗体。以MON-BSA免疫BALB/c小鼠,筛选出小鼠多抗血清、效价均较好的小鼠,进行细胞融合,经多克隆、亚克隆和单克隆等一系列步骤后,筛选出能够稳定分泌MON单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株IE10,鉴定其亚型为IgG1型。在MON-OVA的最佳包板浓度为1μg/mL时,MON mAb对MON的IC50值为1.02 ng/mL,对马度米星铵、二硝托胺、尼卡巴嗪、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺噻吩、喹乙醇、四环素和克伦特罗9种小分子兽药的交叉反应率均小于0.05%。(2)以牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)为载体蛋白,采用EDC/Sulfo-NHS法合成MD人工抗原MD-BSA,得到能够稳定分泌MD单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B4,制备出马度米星铵单克隆抗体(MD mAb),并建立了MD mAb的ic-ELISA标准曲线,得到马度米星铵的IC50值为1.17 ng/mL,且与MON、二硝托胺、尼卡巴嗪、磺胺嘧啶、磺胺噻和喹乙醇共6种干扰物的交叉反应率均小于0.05%。(3)合成Zn/Ni-ZIF-8金属有机骨架材料(MOFs),经过高温煅烧后,得到结构稳定的Zn/Ni-ZIF-8-800,并将其与石墨烯复合,修饰玻碳电极(GCE),然后在修饰电极的表面电化学沉积金纳米粒子(AuNPs)。再在金纳米颗粒涂层表面修饰上MON mAb,构建出一种免标记型的MON电化学免疫传感器,通过电化学循环伏安法(CV)对电极的修饰过程进行表征,利用差分脉冲伏安法(DPV)对牛奶中MON的残留进行定量检测。在最优实验条件下,对MON的线性检测范围为0.25100 ng/mL,检出限为0.11 ng/mL。在牛奶中的加标回收率范围为94.4%112.0%,相对标准偏差(RSD)范围为3.1%9.2%(n=3)。此外,对制备的MON电化学免疫传感器的重现性、稳定性和选择性进行了考察。(4)以AuNPs修饰的GCE为工作电极、负载酶标二抗(Ab2-HRP)的hemin@MOFs复合物为信号探针,构建出基于MD mAb的竞争型电化学免疫传感器,用于定量检测鸡蛋样品中的MD残留量。首先,通过一步法合成hemin@Fe-MIL-88NH2(简称为hemin@MOFs)材料,然后在hemin@MOFs表面修饰上AuPt合金纳米颗粒;再在AuPt上负载酶标二抗Ab2-HRP,并以辣根过氧化物酶(HRP)代替传统的BSA,作为封闭剂对复合物hemin@MOFs/AuPt表面未反应完全的活性位点进行封闭,构建hemin@MOFs/Ab2-HRP/HRP生物探针,催化双氧水(H2O2)发生还原反应。通过hemin@MOFs,AuPt和HRP的协同催化效应,实现多重信号放大作用,大大提高了检测的灵敏度。在最优实验条件下,构建的电化学免疫传感器对MD的线性检测范围为0.150 ng/mL,最低检出限为0.045 ng/mL,并具有较好的重现性、稳定性和较高的灵敏度及选择性。