兴奋性氨基酸转载体-1（excitatory amino acid carrier-1, EAAC1或 excitatory amino acid transporter-3, EAAT3）是神经系统内主要的谷氨酸和半胱氨酸转运体。当其功能受到损伤时,会阻碍机体内谷胱甘肽的合成,使得细胞内氧化压力上升,从而促进诸如阿尔兹海默症（老年痴呆）和帕金森症等神经退行性疾病的发生与发展。不仅如此,EAAC1在脊髓损伤和多发性硬化症等疾病中的适应性表达暗示了它与这类疾病的治疗有着潜在的关系。因此揭示EAAC1的调控机制,可以为多种神经类疾病提供有效的治疗靶标。然而以往的研究主要集中于对EAAC1的功能调控,而对于EAAC1的表达调控却鲜少有人关注。在本课题中,我们创新性地从信号转导这一角度,探讨雌激素对EAAC1的表达调控。因为C6胶质瘤细胞系专一性的表达EAAC1亚型,所以在本研究中我们选取C6细胞作为研究材料。雌激素具有神经保护功效,以往的研究表明它可以对抗谷氨酸毒性以及氧化压力。我们首先用MTT实验验证了降低EAAC1蛋白水平后,细胞对双氧水的压力刺激变得更为敏感。接着我们发现雌激素可以促进EAAC1蛋白表达,而MTT结果显示抑制其表达后会降低雌激素对氧化压力的抵抗作用。我们同时还选择了G蛋白偶联受体GPR30的激动剂G1作为研究对象,发现它同雌激素一样,也能够促进EAAC1的蛋白表达并同时提高细胞在双氧水毒性环境中的存活率。当用GPR30的抑制剂G15处理C6后,E2/G1对EAAC1的表达及其抗双氧水毒性的能力皆被阻抑。以上结果说明,E2通过GPR30促进EAAC1蛋白表达并以此提高细胞对双氧水毒影性的抵抗能力。Sphkl是一种脂类的神经鞘氨醇激酶,它能够促进细胞的存活与生长。有报道称在神经系统中,雌激素能够通过Sphkl提高细胞的生存率,所以我们希望探索Sphkl是否参与了雌激素对EAAC1的调控过程。我们首先验证了：雌激素和G1通过GPR30开启Sphkl在Ser-225位点的磷酸化,该位点的磷酸化代表了Sphkl的激活。接着利用化学抑制剂阻抑Sphkl舌性后,检测到雌激素和G1对EAAC1的调控能力有所减弱。而与此同时,我们利用siRAN技术抑制Sphkl的表达后,成功阻抑了雌激素与G1对EAAC1的表达调控。不仅如此,Sphk1活化后的产物一磷酸神经鞘氨醇（S1P]）,也表现出上调EAAC1表达的能力。因此以上结果说明,雌激素对EAAC1的表达调控依赖于GPR30激活后所导致的Sphkl的激活。S1P还是细胞信号传递过程中的一个重要第二信息,它能介导外界刺激对诸如EGFR和PDGFR等生长因于受体的信号转活过程。因此我们接下来研究了雌激素激活Sphkl之后的下游信号事件。我们验证了,S1P作为GPR30激活后的第二信使,能够上调FGF2在细胞内的mRNA水平。我们发现外源加入FGF2、雌激素、G1和S1P都可以激活FRS2a-ERK信号通路,并由此促进EAAC1的蛋白表达。除此之外,FGF2siRNA以及酪氨酸激酶和ERK1/2的各自抑制剂都能降低E2、G1和S1P对EAAC1的表达上调。这些结果说明,FRS2a-ERK信号通路参与了这三种小分子对EAAC1表达的诱导过程。与以上结果相一致的是,抑制Sphkl后,雌激素和Gl对FGF2的转录以及FRS2a-ERK通路的信号转导都被阻抑了。这些结果表明Sphkl介导的FRS2a-ERK信号转导途径,在雌激素或G1调控EAAC1的表达过程中,发挥了不可替代的作用。概括而言,我们发现雌激素依靠GPR30激活Sphkl后以此转活FRS2a-ERK信号通路,并借由此通路促进EAAC1的蛋白表达。雌激素、S1P以及FGF2这三个分属不同系统的独立信号分子,能够通过被称为"cross talk"的交互应答过程,调控EAAC1的蛋白表达。总而言之,我们揭示了雌激素采用了一个全新的信号转导方式调控EAAC1的蛋白表达。这一发现不仅使我们更好地理解雌激素所发挥的神经保护效果,还为在多种神经退行性疾病中更好地控制EAAC1的蛋白表达,提供了新的靶标。