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集约化养殖模式下,鱼类遭受各种疾病,导致死亡率不断上升,养殖环境遭到破坏,抗生素的使用造成了环境压力的增加和鱼类肠道菌群的破坏。最近益生菌因对鱼类和环境友好且安全而受到人们的高度关注,有望成为抗生素的潜在替代品。本文通过对本实验室保存菌株凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)进行形态特征鉴定、16S r RNA序列比对和系统发育树鉴定,确定为凝结芽孢杆菌(B.coagulans)。本试验探究了凝结芽孢杆菌(B.coagulans)的产酸能力、抑菌性、对胆盐环境的耐受性、以及耐受高温和低p H的能力,对抗生素的敏感性等生物学特性。试验结果表明,凝结芽孢杆菌(B.coagulans)的产酸能力较强,对迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的抑制作用较强,对大肠杆菌(Escherichia coli)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophilia)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑制能力较弱,可耐受90℃高温、p H 3.0和0.3%的胆盐环境;对链霉素、氯霉素、红霉素、四环素、万古霉素、卡那霉素、克林霉素、氨苄霉素以及阿莫西林这九种抗生素均表现敏感。本研究为深入探讨凝结芽孢杆菌(B.coagulans)在水产养殖中的实际应用,选取240尾健康鲤(32.50±0.41 g),分为四个组,每组3个平行,对照组日粮为基础饲料(CK),试验组日粮中分别添加10~7(A)、10~8(B)、10~9(C)CFU/g的凝结芽孢杆菌(B.coagulans),饲喂30 d和60 d,测定生长指标、血清生化指标、免疫相关指标和肠道菌群,以及凝结芽孢杆菌(B.coagulans)在肠道的定植能力。试验结果如下:1.生长指标及相关免疫指标:从试验结果得知,饲喂30 d时,虽然试验组与对照组的生长性能没有显著性差异,但试验组的FBW、WGR、SGR均高于对照组,且FCR均低于对照组;C组对GLU、CHO和ACP的活性有显著促进作用,HDL-C的活性较对照组显著降低(P<0.05);C组中CAT、T-AOC的活性显著提高,试验组均可显著抑制MDA的生成(P<0.05);60 d饲喂结束后,试验组的生长指标均显著高于对照组,FCR值显著低于对照组(P<0.05),且试验A组表现出最好的生长性能。凝结芽孢杆菌(B.coagulans)的添加对GLU、HDL-C和ACP的活性均有显著的提高(P<0.05)。C组的CAT和SOD的含量相比对照组有显著升高,A和B组中MDA的含量得到有效的抑制(P<0.05)。60 d的养殖试验结束后,鲤连续一周注射0.1 m L嗜水气单胞菌(A.hydrophilia)(1×10~8CFU/m L)后,24 h后采血对血清中免疫细胞因子进行检测,结果表明,与对照组相比,A和B组中的促炎细胞因子IL-1β和IL-12的表达水平得到显著上调,同时凝结芽孢杆菌上调了抗炎细胞因子IL-10、TGF-β的表达(P<0.05)。2.肠道组织观察和肠道菌群:30 d饲喂结束后,蛋白酶活性在前肠和后肠,及前肠中的脂肪酶活性在B组中显著高于对照组,淀粉酶及中肠和后肠中的脂肪酶活性在C组中显著升高(P<0.05);60 d养殖试验结束后,在饲料中添加凝结芽孢杆菌(B.coagulans)对鲤前、中、后肠的脂肪酶活性均显著增强(P<0.05);C组肠道中的蛋白酶活性均显著高于对照组(P<0.05);对肠道组织形态进行观察得知,在饲料中添加凝结芽孢杆菌(B.coagulans)对黄河鲤肠道组织结构有显著的促进作用,肠道微绒毛排列更为整齐;中肠和后肠的绒毛高度均显著提高(P<0.05);凝结芽孢杆菌(B.coagulans)对黄河鲤肠道肌层厚度均具有显著的促进作用(P<0.05)。采用Illumina Misep TM PE 300测序平台检测,12个样品共得到优化序列528,841条。在门水平,其中厚壁菌门(Firmicutes)的比例随着凝结芽孢杆菌(B.coagulans)添加量的增加而显著提高(P<0.05),而拟杆菌门(Bacteroidetes)在C组中消失。在属水平,芽殖杆菌属(Gemmobacter)和芽孢杆菌属(Bcillus)的相对丰度与对照组相比显著提高(P<0.05)。3.凝结芽孢杆菌(B.coagulans)在肠道的定植能力:连续一周灌胃黄河鲤10~9CFU/m L的重组凝结芽孢杆菌,1-14 d均可以检测到重组凝结芽孢杆菌,重组菌株可在黄河鲤肠道内停留14 d以上,且凝结芽孢杆菌在后肠中的定植数量较多,有利于凝结芽孢杆菌(B.coagulans)在黄河鲤的健康养殖中更好的发挥益生作用。