论文部分内容阅读
鸡热应激是影响家禽安全生产的主要环境因素之一。研究热应激发生机制，探讨应用分子标记作为评价和改良鸡热应激适应性的指标，对热应激的防控及管理有重要意义。本试验在前期的研究的基础上，选择地方品种灵山鸡50只(公母各半)和引进的隐性白羽洛克鸡50只(公母各半)，应用实时荧光定量PCR、免疫印迹、双荧光素酶报告基因等方法，在mRNA、蛋白及细胞水平上检测了热应激蛋白70的表达情况，分析急性热应激对肉仔鸡Hsp70基因表达差异的遗传效应。 实验结果： 1.荧光定量RT-PCR及Western Blot检测结果发现：热应激初期鸡心脏、肝脏、大脑、脾、小肠及腿肌中Hsp70基因mRNA表达水平最低，随着热应激时间的增长，表达量有所上升，到热应激2h或3h时Hsp70基因mRNA表达量达到峰值，6h时其表达量又呈现一致下降并接近正常水平；肉鸡的心脏、肝脏及腿肌中HSP70的含量的变化与Hsp70mRNA的变化趋势一致。在公鸡中，灵山鸡和隐性白羽洛克鸡组织的Hsp70基因mRNA表达水平分别在热应激2h后和3h后达到最高，灵山鸡心脏等6个组织的表达量显著或极显著高于隐性白羽洛克鸡(P<0.05或P<0.01)；灵山鸡心脏HSP70表达水平显著或极显著高于隐性白羽洛克鸡(P<0.05或P<0.01)。在母鸡中，灵山鸡与隐性白羽洛克鸡Hsp70基因mRNA表达水平均在热应激3h后达到峰值，除了在热应激起始(0 h)和热应激6h后，灵山鸡肝脏和心脏表达量均显著低于隐性白羽洛克鸡(P<0.05)外，其他组织表达量都显著或极显著高于隐性白羽洛克鸡(P<0.05或P<0.01)；灵山鸡心脏、肝脏及腿肌HSP70表达水平显著或极显著高于隐性白羽洛克鸡(P<0.05或P<0.01)。上述结果表明HSP70及其mRNA的表达呈现品种差异、组织特异性和时间特异性。此外，本试验还发现性别差异：在对照组和热应激组中，两个品种公、母鸡各组织的Hsp70基因mRNA表达量及心脏HSP70的含量均存在显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01)。 2.通过鸡Hsp70基因5侧翼区C.-69A>G位点不同基因型与鸡Hsp70基因表达量的关联分析，发现心脏等6个受检组织的AA基因型个体的Hsp70基因mRNA表达水平均高于GG基因型个体，心脏、肝脏和腿肌的GG基因型个体HSP70表达量均高于AA基因型个体。双荧光素酶报告基因分析表明鸡C.-69A>G位点的GG基因型和AA基因型之间的基因表达差异极显著(P<0.01)，GG基因型的活性是AA基因型的1.37倍，提示C.-69A>G位点对Hsp70基因的表达有调控作用。 以上结果揭示了鸡心脏、肝脏、腿肌、脾、大脑和小肠6个组织的HSP70及其mRNA的变化都具有品种差异、组织特异性、时间特异性和性别差异。鸡Hsp70基因5侧翼区C.-69A>G是一个潜在的耐热性能分子标记。