小麦成熟胚基因枪法和农杆菌法遗传转化的研究

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小麦(Triticum aestivum L.)作为世界上最重要的粮食作物之一,应用植物基因工程技术对其进行改良品质、增强抗逆性和提高产量的研究有着十分重要的意义。  小麦遗传转化的成功依赖于其高频植株再生体系的建立、合适的表达载体、各种基因转化方法的不断完善及相应分子检测系统的确定和稳定纯合系的获得等关键因素。因此建立稳定的农艺性状优良的小麦栽培品种高频植株再生体系,寻找合适高效的遗传转化方法是亟待解决的问题。  本文以湖北省栽培小麦品种鄂麦12成熟胚为主要材料,比较研究了五种方法对小麦成熟胚转化的影响,具体包括:基因枪轰击质粒;根癌农杆菌侵染;基因枪轰击(无质粒)后,农杆菌侵染;基因枪轰击(有质粒)后,农杆菌侵染及基因枪直接轰击菌液。并经过分子生物学分析所获得的转GUS基因植株。  结果表明,根癌农杆菌和基因枪相结合的新型转化方法中,基因枪轰击空白对照后,再进行农杆菌侵染实验,这时的愈伤组织成活率、分化率和GUS瞬时表达的平均蓝点数分别为52.15%、32.14%和10.49,与其它转化方法相比,有了较大的提高,具有巨大的应用价值。  小麦基因工程的研究重点之一在于改善其品质,如pin基因在小麦的硬度品质上有着重要的作用。成功构建了含品质基因pinb的表达载体pB-pinb,为农杆菌法向小麦成熟胚转入目的基因做了准备。
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