小反刍兽疫(Peste des Petits Ruminants,PPR),是由麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants Virus,PPRV)感染引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病。该病是OIE规定的A类疫病,我国规定的一类动物疫病。H蛋白是PPRV的主要结构蛋白之一,具有血凝素和神经氨酸酶活性,可诱导机体产生中和抗体,是疫苗和诊断试剂研发的重要靶标。本研究制备了PPRV H蛋白的单克隆抗体,构建了表达H蛋白的重组杆状病毒,并通过动物实验对其免疫原性进行了初步评价,为建立PPRV的检测方法和新型疫苗研究奠定了基础。具体研究内容如下:1.PPRV H蛋白单克隆抗体的制备及鉴定将PPRV H基因克隆至原核表达载体pGEX-KG中,通过摸索蛋白最优表达条件获得纯化蛋白pGEX-KG-PPRV-H,将此蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合和间接酶联免疫吸附实验及亚克隆技术,筛选杂交瘤细胞株,得到4株可稳定分泌抗PPRV H蛋白的特异性单克隆抗体,分别命名为:1C4、1D8、2A1和2E1。经鉴定,IgG亚型均为IgG1,轻链均为Kappa链。通过间接免疫荧光和Western Blot分析,证实了获得的4株单抗均具有较好的特异性。2.PPRV H蛋白在杆状病毒中的表达及其免疫原性初步研究将PPRV H基因克隆至供体质粒Pfast Bac HTB中,将此重组供体质粒转染DH10bac,经PCR验证,得到重组bacmid-PPRV-H。将重组bacmid-PPRV-H转染sf9细胞,成功拯救出重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H。通过间接免疫荧光和Western Blot分析,PPRV H蛋白在杆状病毒表达系统中成功表达。将该重组蛋白免疫BALB/c小鼠,结果表明,Bacmid-PPRV-H蛋白可以诱导小鼠产生针对PPRV的特异性中和抗体。