口腔厌氧菌荚膜的提取、纯化、理化性质检测和对牙龈、牙周膜成纤维细胞、破骨细胞的生物学效应

来源 :第四军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaolinxiaoyi
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荚膜是许多细菌所共有的表层结构,在细菌致病作用中具有重要意义。目前,细菌荚膜在多种感染性疾病中的重要作用已引起广泛重视,但荚膜的确切致病机理仍不清楚。有关口腔厌氧菌荚膜的理化性质、对牙龈、牙周膜成纤维细胞和破骨细胞的生物学效应尚未见系统报道。 本实验采用盐析法粗提和高效液相色谱纯化,提取了牙龈卟啉菌ATCC47A-1、牙髓卟啉菌ATCC35406和中间型普里沃氏菌ATCC252613种口腔厌氧菌荚膜,并对其理化性质、对牙龈、牙周膜成纤维细胞、破骨细胞生物学效应进行了研究。以期为尖周、牙周组织感染中病因学研究提供新的实验资料。 一、荚膜的提取、纯化和理化性质检测 采用盐析法粗提,高效液相色谱纯化,提取了3种口腔厌氧菌荚膜。提取物外观呈白色絮状,主要有机成份为糖蛋白,其蛋白质与糖的比例分别为Pg 8.9∶1、Pi 9.0∶1、Pe 6.5∶1;提纯率分别为0.22%、0.13%和0.086%,内毒素含量极微。活性部份分子量均在5~5.5×10~4μ之间,SDS-PAGE显示,提取物成份复杂,无明显的主带出现;氨基酸组成分析表明,3种荚膜17种氨基酸含量大同小异,主要氨基酸组份为谷氨酸、丙氨酸和甘氨酸,荚膜提取物活性检测显示对MTT法不敏感,活细胞计数法、图像分析法结果显示,提取纯化的牙龈卟啉菌、中间型普里沃氏菌荚膜有较强的生物学活性,可以明显抑制成纤维细胞L929的分裂增殖,使细胞、细胞核明显增大,100μg/ml浓度时细胞面积分别为对照组的2.28倍和1.34倍(P<0.01),细胞核面积分别为对照组的1.47倍和1.23倍(P<0.01);10μg/ml时2种荚膜对L929细胞仍有明显的抑制作用。牙龈卟啉菌荚膜抑制率分别为10μg/ml 21%(P<0.05)、50μg/ml 48%
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