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目的:探讨复合激光联合平阳霉素是否能更有效地干预瘢痕内增生的血管和抑制瘢痕增生,寻找一种更有效的瘢痕防治方法。方法:1.选取15只新西兰大白兔为实验对象,在兔耳腹侧进行瘢痕造模,每只兔耳设计5个瘢痕模型,总共得到增生性瘢痕模型150个,将其进行随机分组:对照组(A组)、脉冲染料激光组(染料组,B组)、复合激光组(复合组,C组)、平阳霉素注射组(注射组,D组)、复合激光及平阳霉素组(联合组,E组)、每组30个瘢痕模型,正常皮肤组F组。2.治疗方案:治疗参数:点阵CO2激光治疗(Deep FX:能量15m J,频率300Hz,shape:2,size:8,Density:5%,1Pass),脉冲染料激光(能量:10J/cm2,光斑大小:7mm,脉冲宽度:3ms,动态冷喷时间20ms)。A组不予任何处理,B组予以脉冲染料激光处理,C组使用脉冲染料激光处理后即刻使用点阵CO2激光治疗,D组于瘢痕内部多点多层次微量均匀地注射平阳霉素(2mg/ml)约0.1ml。E组在复合激光治疗后于瘢痕内多点微量均匀注射共约0.1ml平阳霉素。3.标本的收集:动态观察治疗后的兔耳瘢痕模型的大体形态变化,并于治疗后即刻,第3天,第7天,第14天,第28天切除部分瘢痕组织进行石蜡包埋及切片。4.评价指标:HE染色观察瘢痕内常规病理组织学变化;CD31免疫组化染色观察瘢痕内微血管数量的变化,并计数微血管密度(Micro-vessel density,MVD);VEGF免疫组化染色观察血管情况;Masson染色观察瘢痕内胶原表达并测量胶原容积分数。5.统计分析:SPSS 22.0统计学软件,对实验数据进行统计分析;数据为计量资料,以均数±标准差((?)±S)的形式表示,采用单因素方差分析比较各组内均数的差异,LSD posthoc test比较两组间差异,P<0.05时差异具有统计学意义。结果:1.大体形态观察:兔耳造模后28天左右,所有兔耳创面均愈合完全,且形成了颜色淡红,质地较硬,突出于皮平面的呈增生状态的瘢痕。各组兔耳完成治疗后,A组瘢痕随着时间的推移仍色红,质硬,瘢痕厚度逐渐增加;C、E两组的瘢痕厚度显著变薄,质地软化,瘢痕颜色也逐渐和周围正常皮肤接近,但E组的颜色改变较C组明显。B、D两组瘢痕主要表现为瘢痕色泽有较明显变化,红色逐渐变淡,瘢痕厚度稍有变薄,但瘢痕质地及厚度无C、E两组明显。治疗后28天,五组之间,E组即复合激光联合平阳霉素组的瘢痕厚度最薄,质软,瘢痕整体无论是颜色、厚度均最接近正常皮肤。2.常规病理组织学观察:治疗后即刻、3、7、14天,A组的瘢痕真皮层明显厚于其余四组瘢痕,胶原纤维粗大致密且排列紊乱,部分纤维呈结节状排列,可见大量增生的成纤维细胞聚集,炎性细胞浸润,新生血管明显,未见明显的皮肤附属器官。而其余四组瘢痕胶原纤维均有不同程度地稀疏,成纤维细胞浸润现象也有改善。治疗28天后,A组瘢痕仍表现为胶原纤维增生状态,B、C、D、E四组瘢痕胶原纤维减少,较稀疏,排列趋于整齐,成纤维细胞数量减少,血管密度减少,部分血管管腔闭塞;其中E组胶原密度,排列最接近正常皮肤,镜下未见增生血管。3.CD31免疫组化染色:A组增生性瘢痕内血管增生明显,可见CD31(淡黄色或棕黄色颗粒物)表达增加。在第3、7、14天A组瘢痕镜下CD31阳性颗粒逐渐增多,治疗后28天阳性颗粒才开始较为显著地减少。而在治疗后第3天,B、C、D、E组瘢痕内的毛细血管密度就开始减少,CD31阳性颗粒表达降低。在第7、14天四组瘢痕的微血管减少更为明显。通过CD31标记血管后,计数出各组瘢痕内的微血管密度(Micro-vessel Density,MVD)数值。在治疗后28天,我们将四组瘢痕的微血管密度与A组进行比较,结果显示:PA-B<0.05,PA-C<0.05,PA-D<0.05,PA-E<0.05,差异具有统计学意义。此外,将B、C、D、E各组MVD值进行比较,结果显示:E组〈C组〈D组〈B组,其中B、D两组之间的差异统计学意义(P<0.05),而C、D两组之间的微血管密度差异无统计学意义(P>0.05),C、E两组的微血管密度差异有统计学差异(P<0.05)。4.VEGF免疫组化染色:治疗后3、7、14、28天对照组的VEGF数值表现为缓慢下降趋势,各个时间点的VEGF数值进行方差分析,结果P>0.05,变化无统计学意义。而在治疗后第3天,B、C、D、E组的VEGF阳性颗粒就表现为较A组显著的减少,第7、14天,VEGF减少的更为明显。其中在治疗后28天,将这四组的VEGF数值与A组数值比较,P<0.05,差异具有统计学意义。同时将B,C,D、E四组数值进行两两比较,结果显示:E组〈C组〈D组〈B组,其中B、D两组之间的差异统计学意义(P<0.05),而C、D两组之间的微血管密度差异无统计学意义(P>0.05),C、E两组的微血管密度差异有统计学差异(P<0.05)。5.Masson染色:Masson染色后可见瘢痕内胶原纤维呈蓝染,其中A组胶原粗大,致密且排列无序,胶原之间可见成纤维细胞聚集。治疗后的B、C、D、E组蓝染的胶原纤维渐渐减少,且纤维变细,排列较稀疏。计数各组的CVF,发现E组的CVF值最小。结论:1.复合激光联合平阳霉素可有效软化兔耳瘢痕,抑制瘢痕血管和胶原增生;2.复合激光联合平阳霉素对兔耳瘢痕血管的抑制作用优于复合激光,平阳霉素及单纯脉冲染料激光;3.平阳霉素注射能有效抑制兔耳瘢痕血管增生,疗效优于单纯PDL治疗;4.平阳霉素可以用来辅助复合激光抑制血管增生。