松材线虫侵染后马尾松体内的苯丙烷代谢研究

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松树线虫病是由松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)引起的松属树种上的一种毁灭性的病害。松树的苯丙烷代谢在松树的抗感病机制中起着重要的作用。在代谢过程中可形成植保素、木质素及酚类化合物等抗病次生物质,因此,被认为是植物增强抗病性的重要机制之一。本文针对松树苯丙烷代谢在研究松材线虫病中的重要作用,主要做了以下研究,得出结论如下:(1)松材线虫侵染对马尾松苯丙烷代谢产物的影响苯甲酸、水杨酸和苯乙酸都是松树苯丙烷代谢的途径直接或简介的产物,其含量在松材线虫侵染马尾松的过程中变化明显。研究结果显示马尾松被松材线虫侵染后,苯甲酸、水杨酸和苯乙酸三种有机酸的含量均不断上升,其中苯甲酸和水杨酸含量变化趋势类似,感病后上升,病重后(第12d)下降,而苯乙酸含量感病后持续上升,病重前(第9d)下降。植物体内的苯乙酸可以转化成苯甲酸,而苯甲酸在苯甲酸羟化酶的作用下可以转化为水杨酸,水杨酸可以提高植物的系统抗病性,三者在马尾松的抗感病过程中起着最重要的作用。研究结果显示,在马尾松感病过程中,苯丙氨酸解氨酶和过氧化物酶活性不断上升,发病后下降,多酚氧化酶活性也升高,过氧化氢酶的活性降低。这几种酶的活性变化反映了病情的加重,同时也表明感病松树受松材线虫侵染后,体内的防卫基因的表达不断增强。木质素和H2O2含量在松材线虫侵染后均持续上升,这是马尾松受侵染后的的抗性反应的表现,木质素含量提高可以增加植物抵抗病害的能力,H2O2是生物细胞代谢产生的活性氧,一方面它对植物细胞有毒害作用,可以引起松树的过敏性反应,另一方面它可以限制和封锁线虫生长。感病马尾松苯丙烷代谢产物的这些变化特点,对研究松材线虫病防治和马尾松的抗病育种有着十分重要的意义。(2)苯甲酸羟化酶和水杨酸羟化酶的分离纯化和基本性质研究通过纤维素(DE52)柱层析和DEAE-Sephacel柱对马尾松体内的苯甲酸羟化酶和水杨酸羟化酶进行了分离纯化,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测两种酶的分子量分别为43.58KD和46.67KD,研究发现不同的pH值和金属离子都可以对上述两种酶的活性产生影响。对受松材线虫侵染后的马尾松体内两种酶的活性研究结果显示,苯甲酸羟化酶的活性,持续上升,于病重前(第9d)达到最大活性,而后活性持续下降。实验结果表明,感病马尾松体内的苯甲酸羟化酶在马尾松的抗感病过程中作用明显,苯甲酸含量的升高可能就是因为该酶的活性被抑制。水杨酸羟化酶的活性持续降低,且低于对照株,仅到第12d和18d,出现两个小幅度增长,略高于对照株,较对照株增幅较小而水杨酸羟化酶则变化不显明显,其活性是否对马尾松的发病产生影响,还需进一步的实验论证。
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