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第一部分 野生型Kras在胰腺癌细胞迁移侵袭中的机制初探目的:1.探讨野生型Kras基因过表达对胰腺癌细胞株生物学行为的影响;2.探讨野生型Kras基因作用于胰腺癌细胞侵袭迁移过程的潜在分子机制。方法:1.利用慢病毒转染方法,将野生型Kras和突变型KrasG12D过表达基因分别转染到胰腺癌细胞Panc-1,构建野生型和突变型Kras稳定过表达细胞株,标记为KrasWT和KrasG12D;2.利用CCK-8实验、平板克隆形成实验、细胞周期检测、细胞划痕实验、transwell实验、流式细胞术等检测胰腺癌细胞的增殖、迁移侵袭等生物学行为变化;3.裸鼠成瘤实验检测不同Kras基因背景胰腺癌细胞体内成瘤能力;4.Western blot和免疫组化实验检测上述细胞株和裸鼠肿瘤的相关蛋白E-cadherin、α-E-catenin、MMP-9、MMP-3、P-Stat3 表达水平,探索野生型 Kras 基因作用于胰腺癌细胞的机制过程。结果:1.成功构建KrasWT、KrasG12D过表达胰腺癌细胞株;2.体外实验显示,与Panc-1相比,KrasWT细胞增殖能力、侵袭迁移能力减弱,p＜0.05,差异具有统计学意义,而KrasG12D侵袭迁移能力增强,p＜0.05,差异具有统计学意义,增殖能力差异无明显变化;3.裸鼠成瘤实验显示,KrasWT组肿瘤平均体积小于Panc-1组,KrasG12D组肿瘤平均体积大于Panc-1组,p＜0.05,差异均具有统计学意义;4.Western blot和免疫组化结果显示,与对照组相比,KrasWT 的 E-cadherin、α-E-catenin、MMP-9、MMP-3、P-Stat3表达均上调。结论:1.野生型Kras基因能抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力,突变型Kras能增强细胞侵袭迁徙能力,且在体内有促进增殖作用,这种促进作用在体外实验中并不明显;2.野生型Kras基因抑制细胞迁徙侵袭迁移能力可能是通过wnt/β-catenin通路实现的。第二部分 Lnc-TNFAIP3在胰腺癌细胞迁徙侵袭的机制初探目的:1.探讨Lnc-TNFAIP3过表达与胰腺癌细胞生物学行为之间的关系;2.Lnc-TNFAIP3作用于胰腺癌细胞侵袭迁移过程的作用机制。方法:1.利用慢病毒转染方法,构建Lnc-TNFAIP3稳定过表达胰腺癌细胞株;2.利用CCK-8、平板克隆实验、细胞周期检测、细胞划痕实验、transwell实验、流式细胞术等检测细胞株增殖能力、迁移侵袭能力等生物学行为变化,Western blot检测细胞株相关蛋白E-cadherin、α-E-catenin、vimentin、fibronectin 表达水平,探索 Lnc-TNFAIP3 作用于胰腺癌细胞的机制过程;3.转录组测序获得差异表达基因并进行富集通路分析,选择与Lnc-TNFAIP3紧密关系的基因和通路进行验证,探索其共同作用于胰腺癌的机制。结果:1.成功构建Lnc-TNFAIP3过表达胰腺癌细胞株;2.Lnc-TNFAIP3过表达后,胰腺癌细胞增殖能力、迁移侵袭能力减低,细胞周期、细胞凋亡差异无统计学意义;3.与对照组相比,迁移侵袭相关蛋白 E-cadherin、α-E-catenin、vimentin、fibronectin 表达水平无明显差异;4.经转录组测序筛选获得差异表达的基因2363个,上调1254个,下调1109个,KEGG通路分析上调基因主要参与细胞周期、RNA转运、致病性大肠杆菌感染、肌动蛋白细胞骨架的调节、白细胞跨内迁移、p53信号通路、糖酵解等通路,下调表达基因主要参与氨基酸的生物合成、肿瘤坏死因子信号通路、IL-17信号通路、小分析核糖核酸、胰岛素抵抗、补体系统等通路。结论:1.Lnc-TNFAIP3过表达后,胰腺癌细胞增殖能力减低;2.Lnc-TNFAIP3过表达后,胰腺癌细胞迁移侵袭能力减低,但相关蛋白表达无显著变化;3.通过KEGG通路富集分析,利用cytoscape软件筛选出关联性较高的 10 个基因 Actb、Vc1、Fn1、Rhoa、Cfl1、Actn4、Cdc42、Wasl、Msn、Actg1,以作后续研究。