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背景与目的牙周炎(periodontitis)是菌斑微生物引起的牙周支持组织的炎症性疾病,临床发病率高,是成人失牙的主要原因。近来更有研究显示牙周炎与多种全身性疾病存在密切关系。因此深入研究牙周炎的致病机制对于维护口腔健康乃至全身健康具有重要意义。RNA结合蛋白(RNA binding protein,RBP)可通过多种机制参与炎症反应的调控。胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(Insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)是保守的单链RNA结合蛋白家族成员,与炎症的发生发展相关。本文研究了IGF2BP1在LPS诱导的炎症反应中的作用及其可能的机制,以期为寻找炎症治疗新靶点提供理论依据。研究方法1.qPCR、Western blot检测IGF2BP1 mRNA及蛋白在人皮肤鳞状细胞癌细胞株(A431)、THP-1巨噬细胞、人外周血单核细胞(PBMCs)及人皮肤成纤维细胞中的表达;检测IGF2BP1及其依赖基因IGF2、Gli1 mRNA及蛋白在不同浓度(0、10、100、500、1000ng/mL)LPS 诱导的 THP-1 巨噬细胞、PBMCs 细胞中的表达。2.针对THP-1巨噬细胞,运用RNAi敲减IGF2BP1后用LPS诱导,qPCR、Western blot检测IGF2BP1及其依赖基因IGF2、Gli1 mRNA及蛋白的表达,MTT法及台盼蓝染色试验检测细胞存活,qPCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA的表达,ELISA检测培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白的表达;运用CRISPR/Cas9敲除 IGF2BP1 后用 LPS 诱导,qPCR、Western blot 检测 IGF2BP1 mRNA 及蛋白的表达,MTT法检测细胞存活,qPCR检测TNF-α mRNA的表达,ELISA检测培养液中TNF-α蛋白的表达;运用腺病毒包裹表达载体外源性过表达IGF2BP1后用LPS诱导,Western blot检测IGF2BP1蛋白的表达,qPCR检测TNF-α mRNA的表达,ELISA法检测培养液中TNF-α蛋白的表达。3.针对LPS诱导的THP-1巨噬细胞,免疫共沉淀检测IGF2BP1与NF-κB通路关键因子(p65、p50)间的相互作用。针对THP-1巨噬细胞,运用RNAi敲减、CRISPR/Cas9敲除IGF2BP1的表达后用LPS诱导,Western blot检测IGF2BP1、p65、p50的蛋白表达,ELISA检测p65的DNA结合活性。针对PBMCs细胞,运用RNAi敲减、CRISPR/Cas9敲除IGF2BP1的表达后用LPS诱导,Western blot检测IGF2BP1蛋白的表达,ELISA检测p65的DNA结合活性,qPCR检测TNF-α mRNA的表达,ELISA检测培养液中TNF-α蛋白的表达。研究结果1.IGF2BP1在A431中高表达,在THP-1巨噬细胞、PBMCs中明显表达,在人皮肤成纤维细胞中无表达;IGF2BP1及其依赖基因IGF2、Gli1在不同浓度LPS诱导的THP-1巨噬细胞、PBMCs细胞中明显表达,且呈现浓度依赖性。2.在THP-1巨噬细胞中,RNAi敲减IGF2BP1后用LPS诱导,IGF2BP1及其依赖基因IGF2、Gli1表达均降低(P<0.05),细胞存活力无明显变化(P>0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6 表达均降低(P<0.05);CRISPR/Cas9 敲除 IGF2BP1 后用LPS诱导,IGF2BP1表达降低(P<0.05),细胞存活力无明显变化(P>0.05),TNF-α表达降低(P<0.05);外源性过表达IGF2BP1后用LPS诱导,IGF2BP1表达升高,TNF-α表达升高(P<0.05)。3.在THP-1巨噬细胞中,免疫共沉淀显示IGF2BP1与NF-κB通路关键因子(p65、p50)间存在相互作用关系;RNAi敲减、CRISPR/Cas9敲除IGF2BP1后用LPS诱导,IGF2BP1、p65、p50蛋白表达均降低,p65的DNA结合活性降低(P<0.05)。在PBMCs细胞中,RNAi敲减、CRISPR/Cas9敲除IGF2BP1后用LPS诱导,IGF2BP1表达降低,p65的DNA结合活性降低(P<0.05),TNF-α表达降低(P<0.05)。结论IGF2BP1可通过调节NF-κB通路从而促进LPS诱导的单核/巨噬细胞炎症反应。IGF2BP1可能是潜在的炎症治疗新靶点。