Reg Ⅲγ是一种具有多种功能的抗菌蛋白,如抗炎、抗菌、促进损伤修复及细胞增殖等,在动物的先天免疫中具有重要的作用。由于RegⅢγ的多种生物学功能,其在实际的生产应用中具有极其广阔的前景。但到目前为止,RegⅢγ蛋白的相关功能研究主要集中在小鼠和人,其在猪体内的功能的研究报道较少。为深入研究猪Reg Ⅲγ蛋白的功能,本文构建了一种通过p DCP载体介导的重组表达系统,对猪Reg Ⅲγ进行原核重组表达和纯化,并对其抗菌,细胞增殖及损伤修复的功能进行研究分析。本试验通过采用PCR的方法扩增猪RegⅢγ基因片段,用限制性内切酶Bam HⅠ和XhoⅠ将p DCP质粒和扩增RegⅢγ基因片段进行双酶切,通过T4DNA连接酶将线性化的质粒与RegⅢγ基因片段连接,成功构建RegⅢγ重组质粒。将重组RegⅢγ质粒转化入DE3（BL21）E.coli感受态细胞中,用终浓度为0.1 m M的IPTG进行低温诱导,促使重组蛋白高效表达。采用His亲和标签的亲和层析法进行对重组蛋白进行纯化,通过免疫印迹法对所得的重组蛋白进行验证,并对其进行离体的功能分析。1.结果表明,构建的重组RegⅢγ质粒可以在16℃成功诱导表达,但是其主要以包涵体的形式存在,部分重组猪Reg Ⅲγ蛋白以可溶形式表达,约占总表达量的10%以上。将Dsb C标签切除后,通过考马斯亮兰染色和免疫印迹,可在17 k Da附近看到明显的蛋白条带,符合携带His标签的重组猪Reg Ⅲγ蛋白分子量大小。所以可以确定重组表达是成功的。2.通过牛津杯法测定重组猪Reg Ⅲγ蛋白的抗菌谱,结果显示重组猪Reg Ⅲγ蛋白对链球菌和金黄色葡萄球菌具有抑菌效果,而对于两种革兰氏阴性菌大肠杆菌和沙门氏菌无明显抑菌效果;重组猪Reg Ⅲγ蛋白对于两种革兰氏阳性菌的抗菌活性分析显示,对于链球菌和金黄色葡萄球菌,重组猪Reg Ⅲγ蛋白的MIC90约为2.3μM。3.用不同浓度的重组猪Reg Ⅲγ蛋白作用单层铺满70%的IPEC-J2细胞24 h,通过MTT法测得重组猪Reg Ⅲγ蛋白能促进细胞增殖,以浓度为10μg/m L的效果最为明显,与对照组（DMEM+10%FBS）相比差异显著（p<0.01）。细胞划线实验也显示10μg/m L重组猪Reg Ⅲγ蛋白对于细胞迁移及划痕愈合效果最为明显,4 h后划痕完全长满。结论:综合以上实验结果可知,重组猪Reg Ⅲγ蛋白对于两种格兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和链球菌有明显的抑菌效果,MIC90约为2.3μM,10μg/m L的重组猪Reg Ⅲγ蛋白对于IPEC-J2细胞增殖及损伤修复效果显著。这也为后续对于RegⅢγ蛋白功能的研究与应用提供了基础。