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[目的]构建恒河猴反义miRlet-7i(Micro RNAlet-7i,微小RNAlet-7i)慢病毒载体并鉴定,诱导并培养恒河猴未成熟树突状细胞,用重组的反义miRlet-7i慢病毒载体转染恒河猴未成熟树突状细胞,PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)检测miRlet-7i在恒河猴未成熟树突状细胞中的表达。[方法]1.将慢病毒载体酶切,与目的基因的退火双链DNA连接,其产物加入感受态细胞中培养。将构建成功的慢病毒载体进行测序。对慢病毒载体包装处理,通过浓缩纯化后,应用免疫荧光计数法测定病毒滴度。2.运用密度梯度离心法将恒河猴外周血分离出的单个核细胞中加入细胞因子 GM-CSF(Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)(50ng/ml)、IL-4(Interleukin-4,白细胞介素-4)(50ng/ml)体外诱导并培养恒河猴未成熟的树突状细胞。培养出的细胞通过流式细胞术进行免疫表型鉴定和扫描电镜观察细胞形态和结构变化。3.用反义miRlet-7i慢病毒载体转染恒河猴未成熟树突状细胞,RT-qPCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,实时荧光定量多聚核苷酸链式反应)检测恒河猴未成熟树突状细胞中miRlet-7i、TNF-α、TLR4、NF-κB 的表达。[结果]经测序结果显示目的序列与前期设计序列一致(AGCGCCGTCTT TTTTCTAG)。经细胞包装并纯化后用荧光法测定病毒滴度为1.6E+8TU/ml。诱导并培养的树突状细胞在400×光镜下可见明显树突和分支,通过流式细胞仪检测及扫描电镜观察,细胞免疫表型和超微结构符合未成熟树突状细胞。应用重组的慢病毒载体转染恒河猴未成熟树突状细胞,RT-qPCR检测到转染后miRlet-7i在细胞中受到抑制。[结论]应用恒河猴miRlet-7i序列与慢病毒载体连接成功构建恒河猴反义miRlet-7i慢病毒载体后,取恒河猴外周血中的单个核细胞成功培养并诱导出恒河猴未成熟树突状细胞,用重组的慢病毒载体转染未成熟树突状细胞,经RT-qPCR检测证实miRlet-7i、TNF-α、TLR4、NF-κB下调,目的基因在靶细胞内成功表达。[展 望]应用重组的恒河猴反义miRlet-7i慢病毒载体转染恒河猴未成熟树突状细胞,得到具有免疫耐受性的树突状细胞,对后续应用含抑制慢病毒载体miRNAleit-7i的树突状细胞在恒河猴肝移植免疫耐受的研究中打下了良好的基础。