论文部分内容阅读
本文以广西丰富林产资源巨尾桉为原料,开展了巨尾桉叶多糖的提取、分离纯化、结构表征及体外抗氧化实验。主要研究内容及结果如下:(1)建立了3,5-二硝基水杨酸吸光光度法测定巨尾桉叶中总糖、还原糖和多糖含量的分析方法。在精密度和重现性实验中,它们的相对标准偏差(RSD)分别为2.7%和1.7%,加标回收率99.3%~101.3%。利用本法测定巨尾桉叶总糖含量为15.26%,还原糖含量为1.51%。(2)建立了苯酚-硫酸吸光光度法测定巨尾桉叶多糖的定量分析方法。标准曲线方程为:y=0.0145x+0.0008, R2=0.9996,线性范围为10.0~ 60.0 μg·mL-1。方法的精密度RSD<3%,稳定性RSD≤1%,标准加入法回收率为98%-107%。(3)巨尾桉叶多糖的微波辅助法提取工艺及优化。进行了单因素及正交工艺研究,巨尾桉叶多糖的优化提取工艺条件为:微波功率480 W,液固比45:1,提取时间7 min,巨尾桉叶多糖取率为8.94%。与加热水提取方法的提取率8.23%相比,微波辅助法的提取率提高了8.63%。并讨论了各因素对提取率的影响,结果表明,微波功率、提取时间、提取液固比对多糖得率均有不同程度的影响,影响程度大小顺序为:液固比>提取的时间>微波的功率。(4)巨尾桉叶多糖的除杂纯化方法研究。采用考马斯亮蓝G-250分析方法跟踪测定多糖纯化过程中蛋白质的清除效果。结果表明,聚酰胺对蛋白质吸附作用强,对多糖吸附作用弱,同时具有良好的脱色效果。蛋白去除率达75.2%,脱色率达79.0%,多糖保留率为78.0%。(5)巨尾桉叶多糖的分离方法研究。聚酰胺处理后多糖采用DEAE-52纤维素柱层析进行分级分离,得到水洗组分和以0.1 mol·L-1NaCl洗脱的主要部分;采用SephadexG-100凝胶柱对上一步骤得到的两种组分进一步纯化,得到EP1和EP2两种多糖组分。(6)巨尾桉叶多糖的结构表征。HPGPC分析EP2为均一组分,计算得分子量为9430.269。对EP2紫外光谱扫描,结果表明经过纯化后的多糖不含核酸和蛋白质,纯化效果良好。红外光谱分析得出EP2具有典型的多糖吸收峰。利用GC分析了巨尾桉叶多糖,得到EP2的单糖组成及比例为:阿拉伯糖:甘露糖=1:44.5。(7)巨尾桉叶多糖的抗氧化活性研究。进行了巨尾桉多糖在DPPH-和过氧化氢中的体外抗氧化实验,以抗坏血酸(Vc)为对照,分别考察粗多糖、聚酰胺纯化后多糖ESP、精制多糖EP2的体外抗氧化活性。结果表明,在实验浓度范围内,粗多糖、ESP、EP2对DPPH-有最大清除率的浓度为0.10mg·mL-1,清除率分别为70.05%、62.73%和45.00%;粗多糖、ESP、EP2对过氧化氢有最大清除率的浓度为0.11 mg·mL-1,清除率分别为84.70%、70.90%和64.00%;两种体系抗氧化能力强弱依次为:Vc>巨尾桉叶粗多糖>聚酰胺纯化后多糖ESP>精制多糖EP2。