流产性转录本(abortive transcripts,AT)是一种非编码RNA,长度仅有2～10 nt,AT产生于转录初始阶段的流产性起始(abortive initiation,AI)。流产性起始现象具有普遍性,它发生于一切以RNA聚合酶为特征的生物中,包括真核、原核和病毒等。在转录初期,RNA聚合酶不能快速高效地合成完整的m RNA,而是不断反复合成并释放大量10 nt以下的RNA,通常要经过10-100次循环,直到合成10 nt以上的RNA后才能稳定完成转录过程。机体内AT的含量远高于完整转录的m RNA,但因为AT的长度较短,导致目前常规的RNA定量检测方法无法对其进行检测。方法:使用合成的一条捕获链ss DNA(single strand DNA)(A链)和两条辅助链RNA(B链和C链)来捕获AT,然后利用T4 DNA连接酶能特异性修复DNA-RNA杂合链上的RNA缺刻但不能连接游离RNA的特性,将杂合链上AT与辅助RNA连接起来新RNA链,将其反转录成c DNA用于检测,从而建立机体内AT的RT-q PCR定量检测方法。为进一步探知AT的功能,用促凋亡基因caspase 3和bax转录起始序列前30位作为目的片段构建过表达载体,利用脂质体转染法使其在He La细胞中过表达这两个基因的AT,利用建立的检测技术对caspase 3和bax 8 nt的AT及其母基因(转录时能产生这些AT的基因)表达水平进行定量检测。结果:用该方法结合Taq Man MGB探针法RT-q PCR检测了人工合成的muc16基因4、6、7、8、10 nt AT同源物和Hela细胞中muc16基因4、6、7、8、10 nt AT,证明这个方法可以对机体内4-10 nt的AT进行定性和定量检测。我们发现转染目的质粒的实验组中8 nt的AT含量分别上调了5.6和6.8倍,bax上调了12.1倍,虽然caspase 3基因表达没有变化,但AT序列与其一致且可以抑制其表达的madd则上调了1.7倍。表明流产性转录本通过某种方式在转录水平上对基因表达进行调控。结论:利用该检测技术可以有效的对流产性转录本进行定量检测与分析,对流产性转录本的生物学功能的深入研究提供了重要工具。本研究发现了流产性转录本能调控基因的转录,表明流产性起始可能是一种新的转录调控机制。