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目的:原发性肝癌是我国最常见的肿瘤之一,发病率在所有癌症中排名第六,而且死亡率达到第三位,其确切发病的分子机制不十分清楚。GTF3A(General transcription factor,GTF3A,亦即TFIIIA)、TFIIIB和TFIIIC是RNA转录酶III的通用转录因子。目前GTF3A家族成员TFIIIB和TFIIIC在癌症发生发展中发挥重要作用,GTF3A在肿瘤发病中的作用尚不明确。本文将探讨GTF3A对肝癌细胞增殖生长的影响和作用机制,为研究肝癌发病机制探讨和治疗靶点研究提供一新线索。方法:(1)采用shRNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒感染肝癌细胞系Hep3B和Bel-7402,构建GTF3A敲除稳定肝癌细胞系,shRNA-Hep3B和shRNA-Bel-7402,Western-blotting和RT-PCR实验检测GTF3A蛋白及mRNA表达。(2)采用细胞克隆形成实验和MTT实验检测GTF3A敲低细胞shGTF3A-Hep3B和shGTF3A-Bel-7402细胞克隆形成和增殖生长能力。(3)GTF3A敲低细胞shGTF3A-Hep3B和shGTF3A-Bel-7402细胞通过PI(propidiumiodide,PI)染色后,流式细胞仪检测GTF3A敲低对肝癌细胞周期的影响;Western-blotting实验检测CDK2和cyclinD1蛋白表达水平,明确GTF3A对肝癌细胞周期关键蛋白表达的影响。(4)GTF3A敲低细胞shGTF3A-Hep3B和shGTF3A-Bel-7402细胞经AnnexinV-FITC-PI染色后,流式细胞仪分析GTF3A敲低细胞的凋亡,Western-blotting实验检测Bcl-2和cleaved Caspase-3蛋白表达,判断GTF3A对肝癌细胞凋亡的影响。结果:(1)成功构建了GTF3A稳定敲低肝癌细胞系,Hep3B-shGTF3A#1、Hep3B-shGTF3A#4、Bel-7402-shGTF3A#1和Bel-7402-shGTF3A#4和Hep3B-control、Bel-7402-control对照细胞株。Western-blotting和RT-PCR结果显示,实验组的GTF3A蛋白质和mRNA表达被有效阻断;(2)克隆形成实验和MTT实验结果显示,GTF3A基因敲除肝癌细胞克隆形成率显著低于对照组(p<0.01),GTF3A基因敲除肝癌细胞增殖显著低于对照组(p<0.01)。(3)细胞周期分析实验结果显示,GTF3A基因敲除肝癌细胞组与对照组比,细胞被阻滞在G0/G1期;Western-blotting检测CDK2和cyclinD1蛋白表达,结果显示GTF3A基因敲除肝癌细胞CDK2和cyclinD1蛋白表达下降。(4)流式细胞仪分析GTF3A对肝癌细胞凋亡的影响。实验结果显示,GTF3A敲除实验组较对照组凋亡细胞数显著增多;Western-blotting检测结果显示,GTF3A敲除实验组Bcl-2蛋白表达明显下降,而cleaved Caspase-3蛋白表达显著增高。结论:GTF3A敲除抑制肝癌细胞生长,抑制细胞周期演进;GTF3A敲除增加细胞凋亡。GTF3A可能为癌基因,促进肝癌发生发展;GTF3A可作为肝癌治疗的分子靶点。