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葡萄根癌病是由葡萄土壤杆菌(Agrobacteriumvitis)引起的一种世界性病害,在生产上造成了较大的经济损失。以前的研究表明,本实验室的葡萄土壤杆菌E26菌株(A.vitis)无致病性,是一株很有应用前景的根癌病生防菌株。
突变株M27是一株Mini-Tn5转座子随机插入E26野生型菌株的突变株,没有丧失产土壤细菌素的能力,而生防能力下降。通过初步检测突变株M27的部分生理生化性状以及生防能力下降的稳定性,发现突变株M27与E26野生型菌株反应一致。利用质粒拯救的方法,获得Mini-Tn5转座子的侧翼序列,设计引物PCR筛选E26cosmid文库,筛选得到一个阳性粘粒p1136。继而亚克隆互补片断,针刺接种向日葵苗初步得到可以互补突变株M27生防能力的功能片断H2。根据H2的测序结果,结合ORF分析以及BlastX比对结果,获得完整的功能基因序列,通过缺失突变和互补试验确定,得到EysR。EysR是一个属于LysR类型的转录调控蛋白(LTTR),对E26生防功能有一定作用。另外,EysR与E26菌株中导致HR反应的相关基因关系有待进一步验证。