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目的:1.拟建立稳定的小鼠子宫蜕膜基质细胞(decidual stromal cell, DSC)培养方法,观察DSC形态特征和生物学特性。2.在体外建立稳定的从小鼠骨髓来源的单核细胞诱导成熟树突状细胞(dendritic cell, DC)的培养体系,观察DC形态特征和生物学特性。3.建立细胞共培养模型,初步探讨小鼠蜕膜基质细胞对成熟DC增殖的影响,为进一步研究DC在诱导母胎免疫耐受中的作用打下良好的基础。方法:1.选用孕龄6-8d的C57BL/6孕鼠蜕膜组织,采用胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶混合消化,进行蜕膜基质细胞体外培养。倒置显微镜观察细胞形态学变化;催乳素(prolactin, PRL)免疫组织化学染色进行细胞鉴定;RT-PCR检测DSC表达的细胞因子和趋化因子。2.应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)和白细胞介素-4(interleukin 4,IL-4)诱导培养小鼠骨髓细胞,相差显微镜观察形态学变化;FACS检测细胞表面分子;3H-TdR掺入法检测DC刺激同种异体或同体T细胞增殖能力;ELISA检测其分泌的细胞因子。3.采用小鼠子宫DSC和成熟DC共培养技术,建立细胞共培养模型,观察DSC对DC增殖的影响。结果:1.小鼠子宫DSC在接种24h后大部分已贴壁,贴壁生长的细胞成纤维母细胞状, 5-7d后细胞融合成单层。每4-5d传代1次,传代的细胞形态无明显变化,而传代培养极性渐不明显。PRL免疫组化显示体外培养传代后95%阳性细胞为蜕膜基质细胞,细胞大小形状均一,染色特点为胞质内可见细小的棕色颗粒,且越近胞核染色越深。RT- PCR检测DSC表达GM-CSF、血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)、白介素-2(interleukin 2, IL-2)、白介素-10(interleukin-10, IL-10)等细胞因子;表达单核细胞趋化蛋白-2(Monocyte chemotactic protein-2, MCP-2)、单核细胞趋化蛋白-3(Monocyte chemotactic protein-3, MCP-3)、胸腺活化相关的趋化性因子(Thymus activation-related chemokine,TRAC)等趋化因子。2.用GM-CSF+ IL-4细胞因子联合培养3d后,有细胞集落形成;培养第5d开始,一部分细胞从集落脱落,悬浮于培养基中,呈现树枝状不规则变化;脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导后,成簇的细胞散开,大量的细胞脱落,多数为圆形或不规则形,表面有丰富的伸长毛刺的低密度大细胞。成熟DC高表达DC相对特异性标志CD11c、共刺激分子CD80、CD86、MHCⅡ类分子Ia和Ⅰ类分子H-2Kb。DC具有强烈的激活T细胞增殖的能力;1000个DC,即可有效激发T细胞增殖。LPS刺激成熟8d DC与未经LPS刺激5d DC,其刺激同种异体或同体T细胞增殖能力明显增高,结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。并且在各组中随着DC:T比例增加,其刺激T细胞增殖能力增强,结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。经LPS刺激的成熟DC分泌细胞因子IL-12p70、IL-6、TNFa和IL-1b的水平明显升高,与未经LPS刺激的PBS组结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。3.成熟DC能在DSC单层上继续生长,没有随着培养时间的延长而走向自然凋亡,第15d镜下观察形成细胞集落,发生了克隆性增殖。结论:1.建立的混合酶消化全组分蜕膜的方法,简化了DSC的提纯程序,能获得高纯度的合乎实验要求的DSC,具有经济、实用、方便、可靠的特点。2.细胞因子组合GM-CSF+IL-4+LPS在体外具有诱导小鼠骨髓来源的单核细胞分化为成熟DC的作用,我们建立的体外诱导小鼠骨髓单核细胞的方法可以获得形态、表型和功能都非常典型的成熟DC,方法简便。3.小鼠子宫DSC组成的微环境能逆转成熟DC的自然凋亡,使其重新获得增殖的能力。