【摘 要】
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目的:构建SETD8重组慢病毒载体,探讨SETD8在人乳腺癌细胞株中表达对于细胞凋亡、细胞周期及氧化应激的影响,并观察稳定敲低SETD8表达后乳腺癌细胞对化疗药物敏感性的变化。方法:采用慢病毒介导的方法在乳腺癌细胞系中建立稳定过表达SETD8的MCF-7细胞株和稳定敲低SETD8的MDA-MB-231细胞株,荧光显微镜下观察感染效率。采用定量PCR技术和Western Blot（WB）蛋白免疫印迹
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目的:构建SETD8重组慢病毒载体,探讨SETD8在人乳腺癌细胞株中表达对于细胞凋亡、细胞周期及氧化应激的影响,并观察稳定敲低SETD8表达后乳腺癌细胞对化疗药物敏感性的变化。方法:采用慢病毒介导的方法在乳腺癌细胞系中建立稳定过表达SETD8的MCF-7细胞株和稳定敲低SETD8的MDA-MB-231细胞株,荧光显微镜下观察感染效率。采用定量PCR技术和Western Blot（WB）蛋白免疫印迹的方法在转录水平和蛋白水平验证稳转细胞系的沉默和过表达效率。通过流式细胞仪检测细胞凋亡、周期和细胞内活性氧水平的变化。数据库分析SETD8与周期蛋白相关性,并通过WB检测Cyclin B1和P21蛋白含量的变化。采用临床化疗药物阿霉素、多西他赛和5-氟尿嘧啶处理稳定敲低SETD8的乳腺癌细胞,然后用MTT法验证稳转细胞对不同化疗药物的敏感性。最后,通过流式细胞术观察多西他赛处理48后,稳转细胞周期和凋亡的变化情况。结果:成功构建过表达SETD8的MCF-7细胞和敲减SETD8的MDA-MB-231细胞,通过PCR和WB验证SETD8过表达及敲低稳转细胞系的效率显著（P<0.01）。低表达SETD8的乳腺癌细胞凋亡增加且周期停滞在G2/M和S期,细胞内ROS水平高于对照组,周期蛋白Cyclin B1,p21表达改变。不同浓度多西他赛处理的SETD8敲低稳转细胞系的细胞活性较对照组明显降低（P<0.01）。结论:慢病毒介导下调SETD8表达,使得乳腺癌细胞凋亡增加,周期阻滞在G2/M期,细胞内ROS增多,与多西他赛发生协同作用,从而增加了药物敏感性。
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