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植酸酶(phytase EC3.1.3.8)能水解植酸而显示出在饲料、食品、医药等领域有着广泛的应用前景,在高产菌种选育及其酶学性质成为重点研究领域,但目前植酸酶制剂因价格昂贵,难以推广应用.该项研究的目的筛选出产植酸酶菌株,优化其产酶条件,对其进行诱变,提高产酶量,并对植酸酶分离纯化和研究其酶学性质,以利发展微生物酶学研究和为大规模发酵生产廉价的植酸酶制剂奠定基础.1.植酸酶菌株的筛选及产酶条件的研究本项研究利用植酸酶的菌株能在筛选培养基上形成水解透明圈的特点而进行鉴定,通过初筛和复筛,得到一株产植酸酶较高的黑曲霉(Aspergillus niger)AN00101菌株.2.产植酸酶黑曲霉菌株的诱变选育在对黑曲霉AN01001进行紫外线诱变后,酶活最高的A333菌株比对照高出43﹪.随后用紫外线和LiCl复合诱变酶活提高不大.最后,用亚硝基胍对产酶较高的3个菌株诱变,经复筛后,N28和N118的酶活比黑曲霉AN01001高出47.5﹪和40.9﹪,比A199高出29.5﹪和23.7﹪,N28和N118经过5次连续传代后,产酶能力基本稳定.3.植酸酶的分离纯化及其性质研究黑曲霉AN01001经固体发酵,用缓冲液抽提后,经硫酸铵沉淀,DEAE—纤维素离子交换层析,聚丙烯酰胺凝胶电泳和电洗脱等纯化步骤获得的植酸酶,用SDS-PAGE检测为一条均一谱带,其分子量约为78KD.该酶反应的最适pH值为5.5,在pH2~6之间都有较高的酶活性,pH大于6时植酸酶的活性迅速下降,在pH2~8之间的稳定性很好,活性>70﹪.当pH>8时,酶迅速失活,其反应的最适温度为55℃.