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泛素—蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome parthway,UPP)是真核生物细胞内一种高效的蛋白质降解途径,它参与了体内许多重要的生物学功能,包括细胞周期、肌肉萎缩、抗原递呈、细胞凋亡等,尤其是通过降解细胞各通路激活因子或抑制因子发挥上下调节的作用。其中由F-box蛋白介导的泛素连接酶E3在底物识别过程中起特异识别的作用,具有调控UPP的作用。 本文将UPP通路上的FBXO32基因及其转录因子FoxO基因作为影响猪骨骼肌肌肉生长发育的候选基因进行研究,通过对其克隆、染色体定位、组织表达谱分析、多态位点检测及与生产性状的关联分析,为进一步研究骨骼肌中蛋白合成与降解的信号传导途径打下基础,并为将来应用于分子标记辅助选择育种提供初步依据。主要研究结果如下: 1.分别依据人cDNA信息获得的猪EST所构建的EST重叠群设计的猪特异引物,从湖北白猪基因组中分离克隆了猪FBXO32、FoxO1、FoxO3a和FoxO4四个基因的若干个片段,并提交GenBank数据库,获得了GenBank收录号,分别为DQ288235(FBXO32)、AY995235(FBXO32)、DQ243692(FoxO1)、DQ243691(FoxO3a)、DQ288236(FoxO3a)、DQ243693(FoxO4)。 2.分别利用体细胞杂种板和辐射杂种板技术对四个基因进行了染色体定位。结合两者结果表明FOXO32基因定位在猪4p15,与SW835(LOD=11.49)紧密连锁,其次和S0301(LOD=8.98),S0001(LOD=5.93)连锁;FoxO1基因定位在猪11p11-15,与SW1632紧密连锁(LOD=3.5);FoxO3a基因定位在猪1p13,与SW301(LOD=14.72)紧密连锁,其次和SW781(LOD=10.08)连锁;FoxO4基因定位在猪xq13,与SW1835(LOD=5.9)紧密连锁。 3.以成年长白母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脂肪、舌头、小肠、胃、胚胎,卵巢和子宫内膜组织(共13个组织)作为研究材料,利用RT-PCR检测了猪FBXO32、FoxO1、FoxO3a和FoxO4基因在每个组织中的表达情况,结果发现,四个基因在多数组织中都表达。 4.在FBXO32基因中发现了第5内含子的SnaBI—RFLP(C-T)多态位点;在FoxO3a基因中发现了第2外显子的AvaⅡ—RFLP(T-C)多态位点,该突变位点没有引起氨基酸的改变。采用PCR—RFLP分析技术,利用不同品种猪进行基因型检测,结果表明,FBXO32基因在国内品种(大花白、小梅山、通城猪、清平猪)中呈偏态分布(C等位基因频率为0)、在大白、杜洛克中具有丰富多态性;FoxO3a基因除在杜洛克猪中呈偏态分布(C等位基因频率为0)外,在其余品种中均具有多态性。 5.利用SAS 8.2中的广义线性模型(GLM)程序,以本室与通城县畜牧局种