大豆营养丰富，优质蛋白含量高，氨基酸种类也较为齐全，是畜禽饲料中主要的植物性蛋白质来源。然而大豆蛋白中的大豆球蛋白（Glycinin）和β-伴大豆球蛋白（β-Conglycinin）具有极强的致敏性，会引发仔猪、羔羊、犊牛、幼鼠等幼龄动物肠道过敏反应，造成免疫损伤，导致过敏性腹泻、消化吸收障碍、休克、甚至死亡。此类蛋白的抗原性用一般的方法很难去除。因此，在不影响大豆蛋白营养成分和有利活性成分的基础上，最大程度降低或消除其免疫原性，同时改善其乳化性、热稳定性、溶解性等功能特性，是目前畜牧饲料行业需要解决的首要问题。我国在利用中草药多糖类药物或添加剂用于防治因日粮中的大豆抗原蛋白引发幼龄动物的过敏反应疾病，或优化大豆蛋白抗原性及抗大豆蛋白过敏型饲料添加剂的相关研究与开发还处于早期阶段，虽然近几年已取得部分成果，但与其相关的作用机制还有待进一步研究探讨。　　目的：　　研究甘草多糖-大豆球蛋白偶合物（GPG）的制备方法，探讨GPG抗小鼠过敏性腹泻的作用机制，为开发用于幼龄动物日粮中的抗大豆球蛋白过敏型饲料添加剂，防治仔猪、犊牛、羔羊等幼龄动物的致敏性腹泻，提高幼畜成活率、保证其健康成长提供理论基础。　　方法：　　1.监测28 d内新疆乌拉尔甘草多糖（GUP）灌胃小鼠的生长性能（平均体重、平均日采食量、饲料效率）和免疫指数（脾脏指数、胸腺指数）；ELISA法和流式细胞技术检测小鼠血清IL-2、CD4+/CD8+及NK细胞活性变化情况。　　2.响应面法（RSM）优化GUP提取参数，DEAE cellulose-32 chromatography、Sephadex G-100 column层析柱分离纯化GUP-II，HPAEC鉴定单糖组成；DPPH和·OH清除试验、NO检测和MTT淋巴细胞增殖试验评价体外抗氧化活性评价和免疫活性。　　3.利用等电点差异法分离纯化Glycinin，建立Glycinin诱导小鼠过敏反应性模型并进行临床症状分型，计算经不同浓度GUP-II预处理小鼠的存活率、死亡率、腹泻率等相关指标；ELISA检测小鼠体内IgG、IgE及IL-4、IL-13、组胺的变化情况，流式细胞仪进行小鼠CD4+CD25+FoxP3+Treg/CD4+T比值分析。　　4.干热法制备GPG，UV、FT-IR和SDS-PAGE鉴定其结构；常规法比较反应前后GPG的乳化活性、乳化稳定性、溶解性、热稳定性；间接竞争ELISA法进行GPG体内、体外抗原性检测。　　5. ELISA检测GPG对小鼠肠道中胰蛋白酶、Na+-K+-ATP酶活性、组胺水平、IgE、IgG、SIgA及免疫相关因子（TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8）的影响；并利用qRT-PCR与Western blot法分析其肠道基因PEPT1、DMT1与蛋白表达的变化情况；电镜观察并计算小肠绒毛长度、隐窝深度和上皮淋巴细胞数量。　　结果：　　1.试验小鼠的平均体重、日采食量、饲料效率、免疫脏器指数、血清IL-2、CD4+/CD8+及NK活性细胞指数均随着给药时间的增加而上升，在第28 d达到最大水平；同时，指数变化与给药剂量成正比，给药量100 mg/mL后达到最高水平；显著高于对照组。　　2. RSM得出，提取温度99℃，时间2 h，料液比为1:15是GUP的最佳提取条件；经DEAE cellulose-32 chromatography、Sephadex G-100 column分离纯化后，GUP-II是GUP的主要均一组分， HPAEC验证GUP-II由阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖和葡萄糖（摩尔比1.08:1.25:3.01:5.85）组成。体外抗氧化试验中，当GUP-II的浓度在0.05～1.0 mg/mL时，DPPH、羟自由基清除率分别为21.7～48.33％和31.81～60.94%；体外免疫活性研究中发现，GUP-II组NO产量是对照组的2.5倍，并表现出较强的活化淋巴细胞的能力。　　3.成功建立小鼠口服致抗原蛋白过敏反应模型，并根据小鼠表现出不同程度的过敏症：毛发悚立、皮肤红肿、呼吸衰竭、腹泻、震颤行为、卷缩状态、死亡等，完成动物过敏反应临床分型。相关数据显示，GUP-II低浓度（20 mg/mL）预处理组的小鼠，经不同浓度glycinin诱导过敏后，不仅死亡率、腹泻率和血中的IL-4、IL-13水平明显低于其他剂量预处理组，而且存活率、血清中的IgG、IgE抗体抑制率和CD4+CD25+FoxP3+Treg/CD4+T比值显著高于各剂量预处理组，组胺释放率随着给药剂量的增大，逐渐减少。　　4.通过UV、FT-IR、SDS-PAGE证明美拉德反应的发生及GPG制备成功。在偶合时间为72 h、相对湿度72%、glycinin:GUP-II为3:1、混合溶液终浓度11%、55℃时，GPG的抗原抑制率从89.33%降低到14.44%，抗原性最低；并且导致小鼠过敏性腹泻的死亡率最低（5%）；同时，反应后蛋白的乳化活性、乳化稳定性、溶解性、热稳定性均高于反应前。　　5.在大豆分离蛋白（SPI）的刺激下，经GPG预处理的小鼠，不仅可以有效提高肠道中胰蛋白酶活性、降低Na+-K+-ATP酶活性和组胺水平；降低大豆球蛋白特异性IgE、IgG、SIgA含量，抑制炎症细胞因子TNF-α、IFN-γ释放，降低IL-2、IL-6、IL-8水平；促进小肠上皮细胞PEPT1、DMT1基因与蛋白的表达；小肠绒毛高度提高了12.7%，隐窝深度降低了7.5%，V/C值升高了4.1%，上皮内淋巴细胞数量与对照组相比差异不显著。　　结论：　　1. GUP可显著提高小鼠的生长性能和免疫功能。　　2. GUP-II具有较好的体外抗氧化、免疫活性，随着浓度的升高，活性逐渐增强，作用效果呈现出剂量依赖性。　　3. GUP-II可以有效防治Glycinin诱导的小鼠过敏反应，但只有在低剂量时效果最好，并没有随着给药浓度的升高而升高，无剂量依赖性。　　4. Glycinin和GUP-II经美拉德反应可以成功偶合生成GPG，不仅其抗原性较glycinin显著降低，乳化活性和稳定性、溶解性及热稳定性也有显著提升。　　5. GPG对SPI诱发的小鼠过敏性腹泻具有明显的治疗作用，其抗腹泻机制主要表现为抑制特异性抗体和炎症因子的释放，调节肠道酶和水电解质平衡，降低体内抗原水平而下调体液免疫应答，保护肠道黏膜屏障，促进肠上皮细胞营养相关基因的表达。