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目的:1.建立人轮状病毒的培养、测定体系和病毒腹泻模型。2.研究秦香止泻方对人轮状病毒感染腹泻乳鼠小肠黏膜细胞iNOSmRNA表达的影响。3.研究秦香止泻方对人轮状病毒感染腹泻乳鼠小肠黏膜细胞iNOS和NO含量的影响。通过本课题的完成,从新的角度阐释该方治疗轮状病毒感染腹泻可能的作用机制,为临床提供更为扎实可靠的实验理论依据和开发高效价廉的药物打下基础。方法:1.采用最常用MA-104细胞作为宿主细胞,接种Wa株HRV,让其繁殖培养,采用空斑分析法测定其滴度;测定滴度后的病毒经感染新生的KM种乳鼠。观察接种病毒后8天内乳鼠一般情况、体重增长差异、腹泻评分和小肠黏膜细胞组织形态学的改变。2.新生乳鼠分为空白对照组、模型对照组、病毒唑阳性药物组、秦香止泻方低、中、高剂量组。各组给予相应的药物经口灌胃,观察一般情况和腹泻评分,同时每天每组处死4只乳鼠,采用荧光实时定量PCR检测小肠黏膜iNOSmRNA的表达。3.采用分光光度计法和微板法测定人轮状病毒感染腹泻乳鼠小肠黏膜细胞iNOS活力和NO含量,并做iNOSmRNA、iNOS活力、NO与腹泻程度的相关性分析。结果:1.Wa株人轮状病毒接种到MA-104细胞24h后可以观察到细胞发生了明显的病变,表明该病毒在MA-104细胞中繁殖良好。本次试验测试的HRV滴度为3.0×108PUF/mL。培养的病毒攻击乳鼠后,模型组乳鼠均出现不同程度的腹泻,检测粪便抗原显示粪便中含有HRV,表明模型建立成功。2.秦香止泻方组乳鼠精神状态好,皮肤褶皱少,腹泻程度减轻,能明显缩短HRV感染乳鼠腹泻潜伏期,并减轻腹泻程度,效果优于病毒唑。iNOSmRNA表达CT值与腹泻评分存在一定的直线相关,相关系数为0.913,斜率为-5.916,呈负相关,CT值小,腹泻越严重。3.秦香止泻方能明显降低下调iNOS活力,从而抑制受iNOS控制的NO的合成,分泌性腹泻受到抑制,腹泻程度减轻。结论:1.HRV能在MA-104细胞上比较快速、稳定的繁殖,本实验的繁殖和培养HRV条件可行,通过方法培养的病毒能成功感染新生km小鼠。2.秦香止泻方可能是通过调低小肠黏膜细胞iNOSmRNA的表达,从而降低乳鼠腹泻程度。3.秦香止泻方通过抑制iNOSmRNA的表达,从而抑制iNOS、NO的合成而达到抑制腹泻的作用。