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目的: pprI基因是耐辐射球菌中的特有基因,被认为是耐辐射球菌DNA修复与保护途径的总开关,基因的表达产物PprI蛋白是一种促进DNA修复的多效蛋白的诱导物。近年来我科室研究人员研究证实pprI基因转染对哺乳动物中子和γ射线急性放射损伤具有显著的防治作用,原核表达纯化取得的PprI蛋白,也被证实对γ射线辐射损伤小鼠具有一定的抗放作用。本课题在此蛋白作用机制的基础上,对其细胞毒性及免疫毒性作了初步的研究,为其以后的临床应用前安全性评价提供依据,目前关于此蛋白的毒性研究,尚未见国内外文献报道。 材料与方法: PprI蛋白由本实验室张永芹硕士通过原核表达纯化,以人脐静脉血管内皮细胞为作用对象,应用MTT法检测PprI蛋白对细胞的增殖、毒性作用,采用细胞克隆法检测该蛋白对辐射细胞存活的影响,并绘制出剂量存活曲线。以ICR小鼠作为免疫对象,实验组分为生理盐水免疫组和PprI蛋白免疫组,通过免疫器官脏器系数及T淋巴细胞亚群变化观察此蛋白对小鼠免疫功能的影响。 结果: 本课题初步研究得出,PprI蛋白浓度为2.5、5、10ug/ml范围内对细胞产生抑制作用,且抑制作用与蛋白浓度呈正相关,细胞密度0.5×104作用时间24h的细胞半抑制率IC50为6.40ug/mL。照射剂量为6Gy时,PprI蛋白浓度为100、200、400、600ng/ml范围内对细胞产生增殖作用,蛋白浓度400ng/mL作用36h时增殖作用最为显著。由多靶单击模型拟合的细胞存活曲线得知,PprI蛋白组D0值为1.33,Dq值为1.17,N值为2.41,SF2值为0.51,各值均高于单纯照射组。在小鼠免疫及免疫后三周的观察期间内,计算免疫器官脏器系数可知,免疫初期即初次免疫后14天,高剂量组肾脏重量系数显著低于生理盐水对照组(P<0.05),中、高剂量组胸腺重量系数均显著高于生理盐水对照组(P<0.05);免疫末期即末次免疫后3天,低剂量组肾脏重量系数显著低于生理盐水对照组(P<0.05),高剂量组胸腺重量系数显著高于生理盐水对照组(P<0.05);恢复期即末次免疫后3周,高剂量组肝脏重量系数显著高于生理盐水对照组(P<0.05),低剂量组胸腺重量系数显著高于生理盐水对照组(P<0.05)。由T淋巴细胞亚群检测结果可知,末次免疫后3天,中剂量组小鼠脾脏CD3+T细胞含量显著高于生理盐水对照组(P<0.05),高剂量组CD3+CD8+T细胞含量显著高于生理盐水对照组(P<0.05),高剂量组CD4/CD8比值显著低于生理盐水对照组(P<0.05)。 结论: 1.研究得知PprI蛋白浓度达到2.5、5、10ug/ml时对细胞增殖产生抑制作用,且抑制作用与蛋白浓度呈正相关,细胞密度0.5×104作用时间24h的细胞半抑制率IC50为6.40ug/mL。PprI蛋白浓度为100、200、400、600ng/ml时对细胞产生增殖作用,蛋白浓度400ng/mL作用36h时增殖作用最为显著。 2.由多靶单击模型拟合剂量存活曲线及所得放射生物学参数得知,PprI蛋白可以使细胞的平均致死剂量增大,放射抗拒性增强,细胞修复能力增强。 3.PprI蛋白对小鼠免疫器官的影响主要表现在中枢免疫器官胸腺及主要脏器肾脏,且刺激具有可逆性。对脾脏、肝脏基本无毒性作用。 4.PprI蛋白一定程度上可以提高小鼠脾脏CD3+T细胞和CD3+CD8+T细胞的比例,增强免疫功能。对T淋巴细胞活性无明显影响。 5.本文研究结果提示,PprI蛋白可以使小鼠免疫功能增强,对小鼠免疫器官基本无毒性作用,为该蛋白的临床应用提供一定参考价值。